外泌体富含胆固醇和鞘磷脂。2007年,Valadi等发现鼠的肥大细胞分泌的exosome可以被人的肥大细胞捕获,并且其携带的mRNA成分可以进入细胞浆中可以被翻译成蛋白质,不仅*是mRNA,exosomes所转移的microRNA同样具有生物活性,在进入靶细胞后可以靶向调节细胞中mRNA的水平。这一发现使得研究人员对exosome的研究热情激增,截止目前已经通过286项研究发现了41860种蛋白质、2838种microRNA、3408种mRNA。1983年,外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为“exosome”。现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响,不利于下游实验,难以普遍普及。杭州外泌体提取试剂推荐厂家
外泌体的提取的方式:1、免疫磁珠法,这种方法可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备,但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性,不便进行下一步的实验。2、PS亲和法,该方法将PS(磷脂酰丝氨酸)与磁珠结合,利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似,获得的外泌体形态完整,纯度较高。由于不使用变性剂,不影响外泌体的生物活性,外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9《ScientificReports》杂志发表了该方法较新数据,表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。六是色谱法,这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一,但是需要特殊的设备,应用不普遍。成都正规外泌体提取试剂单价所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。
外泌体:已经有研究报道了各种Hh的胞外转运机制,但实际用于体内Hh分泌和转运的途径尚不清楚。该研究显示Hh在果蝇翅膀成虫盘的分泌依赖于运输所需的内体分选复合物(ESCRT)。在体内,产生Hh的细胞中ESCRT活性的降低导致外部细胞表面保留Hh。此外,产生Hh的细胞中的ESCRT活性对于长距离信号传导是必需的。证据表明Hh和ESCRT蛋白质的库在体内一起分泌到细胞外空间中,并且随后可以在受体细胞的表面一起被检测到。这些发现揭示了ESCRT蛋白质在控制形态发生活性中的新功能,揭示了一种新的机制,通过细胞外囊泡在组织中转运分泌的Hh,这是长距离靶向诱导所必需的。
外泌体在肺病治病中的作用:有研究发现,使用外泌体运载紫杉醇(PTX)可显着提高病细胞对PTX的吸收,将PTX加载至外泌体中显着增加了药物细胞毒性,Exo-PTX能显着压制肺病的发展。Aqil等在进行裸鼠实验时发现,加载至外泌体中的雷公藤红素(Exo-CEL)比普通的CEL有更强的抗一些病症功效,且在小鼠中未发现明显全身性或系统性毒性,由此可以证明,外泌体制剂可以有效增强CEL功效并降低与剂量有关的毒性。到目前为止,外泌体在肺病治病方面的研究主要集中于免疫压制,有效的外泌体药物递送平台的搭建以及外泌体相关的潜在治病靶点的探索。已有的研究表明外泌体在肺病治病领域有着广阔的前景,期待外泌体在肺病治病领域早日得到突破,造福更多的患者。用无菌针管吸取上层含有外泌体的液体,置于80℃储存备用。
外泌体作为RNAi药物载体的疗效:这项研究,检测了利用exosomes作为RNAi靶向药物的效果,并证明了这个过程中exosomes进行免疫逃逸的机制:对exosomes进行基因修饰(命名为iExosome),装载上靶向胰腺病细胞KRAS突变基因的RNA干扰药物,在小鼠模型上进行试验,结果表明,iExosome比同样经过修饰的脂质iLiposome递送效果更好,能够压制侵袭性胰腺病生长;这得益于exosomes表面的CD47,它能够阻止exosomes在血液循环系统中被单核细胞清理。这项研究结果对致力于exosomes转化医学的科学家来说,可谓振奋人心!同时可获得高纯度和高回收率的外泌体——如新西兰IZON开发的系列的外泌体排阻剂。石家庄正规外泌体提取试剂价格
由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体,大于一般蛋白质。杭州外泌体提取试剂推荐厂家
外泌体相关miRNA与肺病的诊断:miRNAs是一类含有20~25个核苷酸的非编码小RNA,能够通过下调或压制靶mRNAs来调节转录水平上的基因表达,目前非编码RNA被普遍发现存在于NSCLC患者外泌体中,参与一些病症的形成和演化过程。单个miRNA可能通过压制性复合物与多个mRNA结合,从而阻滞整个生物通路。因此,外泌体的miRNA具有成为NSCLC标志物的优势。Chen等在152例肺病患者的研究中初次报道了循环游离miRNA的表达,与75例健康者相比,发现了两种高表达的miRNA(miR-25和miR-223)。Rabinonowits等对27例肺病患者和9例健康人的血浆外泌体中12个miRNA的表达进行了评估,结果显示,12个一些病症相关的miRNA*在肺病患者中过度表达。Cazzoli等收集了30个血浆样本,发现4种外泌体miRNA(miR-378a、-379a、-139-5p、-200b-5p)在肺病患者血清中明显升高,用于筛查患者与健康人ROC曲线下面积(AUC)为0.908。杭州外泌体提取试剂推荐厂家
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外泌体鉴定:参与生物功能的分子,如凋亡转接基因2互作蛋白X(ALIX)、一些病症易感基因101蛋白(TSG101)、热休克蛋白(HSP70、HSP90),以及细胞分泌的特异性蛋白。外泌体高通量检测。外泌体内含有与细胞来源相关的蛋白质和核酸,可以运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等进入受体细胞,参与细胞间通讯。不同细胞来源的外泌体所含有的蛋白成分和RNA不太相同,可作为多种疾病的早期诊断标记物,也能作为靶向药物的载体进行疾病治病。1.miRNA高通量测序。2.mRNA高通量测序。3.lncRNA芯片(人、小鼠)。4.ceRNA芯片(人、小鼠)。5.蛋白质组分析(iTR...