BMC原代分离步骤:1) 抽取人的外周血于肝素抗凝管中,取足5mL新鲜血液,加入PBS按1:1稀释血液(一般**管2mL+2mL)。2) 取淋巴细胞分离液5mL于15mL灭菌离心管中待用。3) 吸取稀释血液,在离分层液上方1cm处,沿试管壁徐徐加入,使稀释血液重叠于分层液上,并与分离液形成明显界面。4) 室温,离心2000rpm,20min。此时离心管中形成5层:较上面是血浆,血浆层和淋巴细胞分离液之间是淋巴细胞层呈白膜状。5) 小心吸取中间呈白膜状的单个核细胞层,尽量全部吸出单个核细胞。加5倍以上体积的PBS洗2次,每次离心1500rpm,10min。利福平溶液怎么配制:配制时每毫升可加入~5滴 10 N NaOH以助溶。溶出介质(EP,pH1.0)
潮霉素 B(Hygromycin B) 是一种由吸水链霉菌产生的,能够克制细菌、菌类和 一些高等真核生物细胞内的蛋白质生物合成来。潮霉素 B 属于是氨基糖苷类,通过 克制蛋白质的合成来阻止微生物生长,对原核细胞与真核细胞都是克制作用。 Leagene Hygromycin B solution 常用于转基因实验的抗性筛选,筛选具有潮霉素 B 的抗性基因。 产品组成: 编号 名称 CA0012 CA0012 Storage Hygromycin B solution (50mg/ml) 使用说明书 10ml 20ml 1份 4℃ 避光 操作步骤(光供参考): 1、 根据实验具体要求操作。 2、 一般植物细胞筛选浓度在 20~200μ g/ml,动物细胞筛选浓度 50~1000μ g/ml,应根 据具体实验选择较佳筛选浓度。溶出介质(EP,pH1.0)固体试剂的取用:药匙每取完一种试剂后都必须用干净的纸擦拭干净。
利福平助溶剂:性状:白色或类白色粉末,无刺激气味,易溶于水。主要成分:医药级药物赋形剂。成分特性:赋形剂性质稳定,与主药无配伍禁忌,不产生副作用,不影响疗效,在常温下不易变形、干裂、霉变、结块、对人体无害、无生理作用,不与主药产生拮抗作用,不影响主药的含量测定等。作用机理:浅化学机理助溶,根据药物分子结构贴合相应的亲水基团,从而达到助溶目的。使用方法:利福平与助溶剂按7:3比例添加混合均匀,即得70%水溶利福平,混合后粉碎一遍效果更佳。(如需加工10-30%水溶利福平,用加工好的70%水溶剂福平加兽药辅料稀释即可。)标准:企业标准,混合后水溶利福平基本无白点,加入水中,溶解迅速至澄清, 溶解度4000PPM以上, 溶液中性弱碱, PH值7左右。注意事项:加工成水溶性原料后,应在干燥密封处保存,避免氧化!!!
弱酸-弱碱型缓冲溶液(即共轭酸碱缓冲溶液)、酸式盐缓冲溶液、强酸或强碱溶液。在一些特殊情况下也使用混合体系的缓冲溶液(两种pKa相近的共轭酸碱缓冲溶液混合而成)。大家比较熟悉的是共轭酸碱缓冲溶液,例如,HAc-NaAc、HF-NH4F、NH3-NH4Cl。其实,酸式盐也可作为缓冲溶液,因为酸式盐的pH值大多是恒定的,随其浓度增减的变化不大,例如,NaHCO3溶液在1.0M至0.01M之间,其pH值几乎都在8左右(理论值为8.3),同样可以抵抗溶液中产生的少量强酸、强碱(或外加),保持溶液的pH值恒定或变化微小。强酸、强碱溶液也能缓冲滴定过程中产生的少量强酸或强碱,保持溶液的pH值变化很小,故强酸强碱也可作为广义的pH缓冲溶液(以前的分析化学教材就是这样分的),例如,EDTA络合滴定铋,需另外加入一定量的0.1mol/L硝酸溶液,就是为了增强溶液对滴定中产生的H+的缓冲作用。pH缓冲溶液有何用途:检查仪器显示值和标准溶液的pH值是否一致。
科研实验中试剂取用应注意事项:1. 取用少量的液体—使用胶头滴管a. 应在容器的正上方垂直滴入;胶头滴管不要接触容器壁【防止沾污试管或污染试剂】;b. 取液后的滴管,应保持橡胶胶帽在上,不要平放或倒置【防止液体倒流,沾污试剂或腐蚀橡胶胶帽】;c. 用过的试管要立即用清水冲洗干净;但滴瓶上的滴管不能用水冲洗,也不能交叉使用。2. 取用一定量的液体—使用量筒a. 当向量筒中倾倒液体接近所需刻度时,停止倾倒,余下部分用胶头滴管滴加药液至所需刻度线;b. 读数时量筒必须放平稳,视线与量筒内液体的凹液面的低处保持水平。丁胺卡那霉素给药说明:不可直接静脉推注,以免产生神经肌肉阻滞和呼吸克制作用。溶出介质(EP,pH1.0)
pH缓冲溶液有何用途:pH测量前标定校准pH计。溶出介质(EP,pH1.0)
科研实验中试剂取用应注意事项:1. 固体试剂的取用:取用固体药品时药匙必须是干净的.一支药匙不能同时取用两种或两种以上的试剂.药匙每取完一种试剂后都必须用干净的纸擦拭干净,以备下次使用.药匙的两端为大小两匙,取固体量较多时用大匙,较少时用小匙。2. 取用不定量(较多)液体——直接倾倒a. 瓶塞必须倒放在桌面上【防止药品腐蚀实验台或污染药品】;b. 直接倾倒时瓶口必须紧挨试管口,试管45度,并且缓缓地倒【防止药液损失】;c. 贴标签的一面必须朝向手心处【防止药液洒出腐蚀标签】;d. 倒完液体后,要立即盖紧瓶塞,并把瓶子放回原处,标签朝向外面【防止药品潮解、变质】。溶出介质(EP,pH1.0)
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