对RNA的科学研究,首先要从植物或者动物等组织中提取出合格的RNA。在实际RNA提取中,有几个提取原则:1、保证RNA一级结构的完整性;2、提取的RNA样品中不应存在对酶存在压制作用的有机溶剂及过高浓度的金属离子;3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到较低程度;4、排除其它核酸分子(DNA)的污染。常用RNA提取方法有:1TRIzol法;2TRIzol+过柱法;3CTAB+过柱法;4试剂盒法。RNA提取试剂盒Biomarker Plant Total RNA Isolation Kit (Polysaccharides&Polyphenolics–rich),能从植物组织,特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织(如成熟水稻叶片,棉花叶片,拟南芥种子,香蕉,马铃薯块茎,苹果,西瓜果肉,猕猴桃,梨,月季等)中快速提取总RNA,同时可以处理大量不同样品。RNA的碱基配对规则基本和DNA相同,不过除了A-U、G-C配对外,G-U也可以配对。天津RNA提取试剂推荐厂家
DNA和RNA的鉴别染色:利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定,非固定细胞核酸,或作溶酶体的一种标记。观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果,但该方法已被许多实验室普遍采用。RNA是核糖核酸,DNA是脱氧核酸。区别:溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,因此,常用乙醇来沉淀溶液中的DNA和RNA。DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚来沉淀RNA。温州RNA提取试剂推荐厂家该EpiQuik™总RNA提取试剂盒提供了一种快速,简单,经济有效的方法。
RNA提取试剂盒原理:该EpiQuik™总RNA提取试剂盒提供了一种快速,简单,经济有效的方法,可从全血,哺乳动物细胞,细菌细胞和菌类细胞中分离总RNA。优化的洗涤剂和离液盐用于裂解细胞并灭活核糖核酸酶。专门的高盐缓冲系统允许RNA物质基团结合到旋转柱的玻璃纤维基质上,同时使污染物通过柱被有效地洗去。纯的RNA用RE缓冲液洗脱,不用酚提取或醇沉淀。 RNA提取试剂盒特点:1、快速程序在25-40分钟内提供高质量的总RNA。2、即用型RNA,可在绝大多数下游应用,例如RT-PCR,cDNA合成,Northern Blotting,Differential display,Primer Extension, mRNA selection。3、适用样品:全血,哺乳动物细胞,细菌细胞和菌类细胞(样品起始量:300μl全血,10 ^ 7个哺乳动物细胞,10 ^ 9个细菌细胞和10 ^ 8个菌类细胞。总共可以使用该试剂盒进行50次标准提取。总RNA的产量可达30μg。产量可能因样品类型而异。)
RNA可分为:mRNA:在蛋白分子合成过程中,作为“信使”分子,将基因组DNA的遗传信息(即碱基排列顺序)传递至核糖体,使核糖体能够以其碱基排列顺序掺入互补配对的tRNA分子,进而合成正确的肽链,实现遗传信息向蛋白质分子的转化。tRNA:把氨基酸搬运到核糖体上,tRNA能根据mRNA的遗传密码,依次准确地将它携带的氨基酸,掺入正在合成的肽链中,实现肽链的延伸。与正在进行翻译的mRNA结合,而后rRNA将各个氨基酸残基通过肽键连接成肽链进而构成蛋白质分子。rRNA:一般与核糖体蛋白质结合在一起,形成核糖体。RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯,需电泳检测。
环状RNA是一类产生于RNA剪切过程中的封闭唤醒RNA分子,主要由外显子和(或)内含子构成。环状RNA参与了复杂的RNA-RNA的相互作用网络,在基因转录后调控中发挥作用;环状RNA可直接与蛋白质结合,也可通过RNA介导间接与蛋白质发生关联,影响蛋白质功能;部分环状RNA具有翻译功能。研究发现,环状RNA与一些疾病的发生、发展具有直接关联,为一些疾病发病机制提供了新思路,除此之外,环状RNA 在与衰老、炎症等生理、病理现象方面也有重大应用。为了使这种酶对降解的影响较小化,较好在采集时就稳定好样本中的 RNA。石家庄RNA提取试剂厂家推荐
很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。天津RNA提取试剂推荐厂家
RNA提取真正需要注意的要点:你的植物组织样本采样、保存正常吗?组织裂解充分了吗?组织起始量是否过大?起始量过大的话,他们得带进去多少RNase呀,导致裂解液不能充分压制内源性的RNase,失败就在预料之中!你的细胞活性好吗?细胞都到衰亡期了,你提什么RNA呀;细胞加的那么多,破壁不充分,怎么裂解的好呢,他们本身得带进去多少内源性RNase污染呀!转移液体时吸到沉淀了吗?吸水相时碰到中间层了吗?乙醇干燥净了吗?裂解样本的过程是重中之重液氮研磨(手工):要先加液氮预冷一下研钵,然后研磨,研磨过程要保证研钵中一直有少量液氮,研磨完成一个样本后,直接加入裂解液涡旋震荡后放常温,或者直接丢到液氮中,全部研磨后一起加裂解液。液氮研磨(研磨仪):研磨模块丢到液氮中预冷,直到没有气泡冒出视为预冷完毕。在2ml圆底离心管(不需要无酶管,液氮研磨中不破裂就好)中加入5mm钢珠一粒,放进样品,投入液氮中预冷。把所有预冷好的离心管**研磨模块中,放进研磨机震荡20-30秒。完成后马上加裂解液,涡旋。天津RNA提取试剂推荐厂家
粪便总RNA快速提取试剂盒:独特裂解剂/裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后RNA在高离序盐状态下选择性吸附于玻璃奶,然后将粗纯化的玻璃奶转移到离心柱,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将腐植酸、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,较后低盐的洗脱缓冲液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。试剂盒特点:离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界有名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。兼容性强,适用于各种不同的土壤、粪便以及其他soil.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。多次柱漂洗确保高纯...