鼠尾胶原备用胶凝程序:1)在冰上放置以下物品:胶原蛋白I、无菌10×PBS、无菌蒸馏水、无菌1M NaOH。2)确定胶原蛋白I待使用溶液所需的较终浓度的体积。3)在冰上放置无菌管以收存胶原蛋白I。4)在无菌条件下执行以下步骤。4.1加入10×PBS(终体积/10)mL4.2计算要使用的胶原蛋白I的体积(不要添加到管中直到步骤4.6为止)终体积x终胶原蛋白I浓度(mg/mL)。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的胶原体积×0.023)mL的无菌冰冷1M NaOH。4.4向4.3溶液中加入下述体积的无菌冰冷蒸馏水:添加蒸馏水体积=V(终)—V(胶原蛋白)—V(10× PBS)—V(1M NaOH)4.5混合管中的物质并放入冰中。4.6加入胶原蛋白I并计算体积,混匀,冰上备用。5)胶原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小时。6)使用时,无菌条件下将溶液加入到细胞培养装置中37°C凝胶30min。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。制备鼠尾胶原:将尾腱剪断置于平皿中,生理盐水浸泡。广州鼠尾胶原服务电话
鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项:将培养器皿在室温(25 度左右)下 放置 20 分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是 10PBS, 使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。 B.含细胞的三维胶原的制备(以配制 200ul鼠尾胶原蛋白(5mg/ml)加到(如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH 加到胶原溶液中,会由于 NaOH 不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即 混匀。再加入 23ul 10PBS 10培养液,混匀(混匀后pH 左右,如果 PBS 或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用 pH 试纸测试)。加入 760ul 的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放 20分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。 注意事项 型在室温下pH 中性时可迅速成胶,在操作过程中要 尽量保持低温。鼠尾肌腱胶原蛋白I(rat tail tendon collagen type I)根据Birkedal-Hansen方法,经过醋酸(HAc)抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备所得。广州鼠尾胶原哪里买鼠尾胶原是一种天然培养基,它具有促进体外培养细胞(特别是上皮细胞)贴壁的作用。
胶原蛋白的功效与作用:1、胶原蛋白中含有大量甘氨酸,在人体内不仅参与合成胶原,而且还是大脑细胞中是一种克制性递质,以产生对的安静作用,对焦虑症、神经衰弱等有良好的治好作用胶原蛋白食品,在胃里可以克制蛋白质因胃酸作用引起的凝聚作用,从而有利于食物的消化,还有克制胃酸和胃原酶分泌的作用,可减轻胃溃疡患者疼痛,促进胃溃疡愈合。2、胶原蛋白是身体免疫作用中负责重要功能的阿米巴细胞清扫异物的感知器,因此对预防疾病很有帮助。可提高免疫机能、克制细胞、活化细胞机能、活化筋骨、治好关节炎及酸痛。
鼠尾胶原醋酸溶解:1.将鼠尾胶原加入到0.1M的醋酸中,制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。2.建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。3.稀释一定数量的胶原溶液。4.按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。5.从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的,这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。在接种细胞前用无菌的水漂洗。制备鼠尾胶原:吸取上清,分装成小瓶,4℃保存。
鼠尾胶原是一种天然培养基,它具有促进体外培养细胞(特别是上皮细胞)贴壁的作用,同时它也是一种天然的黏附剂,当我们需要在培养瓶或培养皿内放置小玻片,制备细胞爬 片时,可在瓶底涂一层胶原,再放上小玻片,自然干燥后小玻片就固定于培养瓶之中。通 过本实验可掌握鼠尾胶原的制备方法,以及如何切割小玻片,并利用鼠尾胶原将其固定于 培养瓶内。 实验设备及材料: 大鼠尾巴、剪刀、镊子、止血钳、弯头吸管、平皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、天平、生理 盐水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、盖玻片、培养瓶、钻石笔、鼠尾胶原。 实验内容: 1、制备鼠尾胶原。 2、切割小玻片。 3、利用鼠尾胶原将小玻片固定于培养瓶内。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三个月以上的时间。广州鼠尾胶原厂家
鼠尾胶原蛋白 型在浓度1mg/ml 以上, pH 左右时可形成具有一定强度三维胶。广州鼠尾胶原服务电话
鼠尾胶原类似物的建立:目的:探寻建立类似物的培养方法。方法:原代培养人皮肤成纤维细胞,制备鼠尾胶原,将鼠尾胶原溶液、浓缩培养基、NaOH溶液和以血清重悬的成纤维细胞溶液在适当的比例下混合后形成凝胶构建类似物。结果:形成的类似物中成纤维细胞生长状态良好,并且组织块具有一定弹性和抗拉伸能力。结论:①利用鼠尾胶原可以构建类似物,该模型是进行皮肤部位型培养和制作复合皮的关键与基础;②成纤维细胞胶原凝胶复合物有着良好的生物学特性,它是研究成纤维细胞与细胞外基质之间以及细胞之间相互作用的良好模型。广州鼠尾胶原服务电话
实验应用:探讨应用鼠尾胶原在豚鼠前庭毛细胞膜片钳实验中的促进毛细胞贴壁效果。方法制作鼠尾胶原,观察全细胞膜片钳实验中,自制的鼠尾胶原对前庭毛细胞的贴壁黏附作用。结果无鼠尾胶原时,前庭毛细胞悬浮于外液,不宜封接;有鼠尾胶原时,前庭毛细胞贴附于培养皿底壁,易于封接和长时间(约8h)的观察和记录。鼠尾胶原对前庭毛细胞具有良好的贴壁黏附促进作用。结论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。碱法提取胶原蛋白常用的处理剂为石灰、氢氧化钠、碳酸钠等。正规鼠尾胶原厂家推荐鼠尾胶原蛋白I型,用那一种胶原酶可以溶解:1.将胶原加入到0.1M的醋酸中,制备成浓度为...