无锡珠海无血清细胞冻存液

冻存细胞注意事项：冷冻保护剂可降低培养基的冰点，并可减缓冷却速度，较大降低冰晶形成的危险(冰晶可损伤细胞，导致细胞死亡)。注：DMSO可促进有机分子进入组织。操作含DMSO的试剂时，应采用与此类物质安全危害相适应的设备和操作规范，并应按照当地法规处置此类试剂。建议可使用厂商生产的无血清细胞冻存液，使用方便，复苏率高。注意冷冻保护剂DMSO的品质：DMSO应为试剂级等级，无菌且无色，以5-10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。无血清细胞冻存液，用于各种动物细胞株（tumour细胞和常规细胞），冻存细胞可在-80℃长期保存。无锡珠海无血清细胞冻存液

胞冷冻保存方法：选择冻存处于对数生长期的细胞有助于提高复苏细胞存活率。1.按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。2.按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数。（参考：5×105至5×106 cells/ml）。3.取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量，置于离心管中，离心收集培养细胞（参考离心条件：1,000~2,000 rpm，4℃，3~5 min）。移去离心管中的上清液。4.加入适量的无血清型细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度为5×105至5×106 cells/ml。缓慢地混合均匀，制成细胞混合液。5.将离心管中的细胞混合液分装于已标示完全的冷冻保存管中。6.直接将含细胞混合液的冻存管放入-80℃冰箱，长期冷冻保存。7.若研究者需要液氮保存时，可将完全冻结的冻存管（放入-80℃冰箱后至少一昼夜）移至-196℃液氮罐。武汉正规无血清细胞冻存液厂家推荐无血清细胞冻存液产品性能：不含动物来源性蛋白，能减少各类病毒、霉菌和支原体等的污染。

细胞冻存是细胞培养技术中细胞进行保种并长期保存的常用方法，其中细胞冻存液，作为细胞冻存时必须使用的一种溶液，不光光是说只是用来进行细胞的保存，在细胞的购买、寄赠、交换和运送过程中也起着关键作用，因此选择一款好的细胞冻存液就尤为重要。如果不加任何条件直接冻存细胞，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH值改变、蛋白变性等，从而引起细胞死亡。而细胞冻存液就相当于细胞的保护剂，在冻存细胞时将细胞悬浮于冻存液中，可使冰点降低，提高细胞膜对水的通透性，在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞，可以防止或减少冷冻冰晶对细胞的损伤作用。这样就使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，在需要时直接复苏就可恢复细胞活性。

无血清细胞冻存液：解冻解冻后，应该立即铺板在预先包被好的培养皿中。上述冻存的一管细胞可以成功的铺板到6孔板的 1 - 2孔。1. 开始之前，提前准备好以下材料：试管，恢复至室温的培养基，预先包被的培养板，确保整个解冻复苏程序可以在较短的时间内完成。注意：不要在37°C水浴中加热培养基。2. 在37°C水浴中快速解冻，持续温和的在水中晃动冻存管，直到剩余少量细胞还处于冻存状态。3. 水浴中取出冻存管，用70%的酒精或异丙醇擦拭除菌。4. 用2 mL的血清移液管把细胞悬液转移到一个15 mL的锥形试管。注意：用2 mL的血清移液管代替1 mL的头可以减少细胞聚集体的分解。无血清细胞冻存液用途：无血清细胞冻存液用于造血干细胞、间充质干细胞等干细胞的储存。

细胞冻存液的原理及配制方法：细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以较大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。在冻存细胞时将细胞悬浮于冻存液中，可使冰点降低，提高细胞膜对水的通透性。无锡珠海无血清细胞冻存液

需液氮冻存，且不能原位（如孔板）冻存。无锡珠海无血清细胞冻存液

细胞冻存秘籍：细胞复苏细胞复苏：如果细胞保存在液氮中而不是液氮之上时，应特别注意。如果在储存期间冻存管发生泄漏，则会缓慢地充满液氮；在解冻时，液氮转换回气相可能会导致。安全注意事项：将冻存管从液氮罐中取出并解冻时，请始终穿戴防护服，手套和面罩或护目镜。A. 通过在37℃的水浴中轻轻晃动解冻细胞。为了减少污染的可能性，O形圈和盖子应该保持在水面之上。解冻应该是快速的（大约2分钟）。一旦内容物解冻，将冻存管从水浴中取出，浸入或用70％乙醇喷洒。之后的操作都应该在严格的无菌条件下进行。B. 将内容物转移到25平方厘米的组织培养瓶或100mm组织培养皿中，并用完全培养基稀释。对于大多数细胞系来说，没有必要立即除去低温保护剂。正常情况下，解冻后8-24小时更换培养基以除去保护剂。然而，对于对冷冻保护剂敏感的那些细胞系，可以离心细胞悬液以去除冷冻保护剂。然后将细胞放置在细胞培养箱，37℃培养。在细胞恢复期间，避免培养基过碱。无锡珠海无血清细胞冻存液