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细胞转染效率低下的几个大坑：1.试剂过期有时候转染效率低下，还要考虑会不会存在试剂过期的情况。毛博当年做转染整整半年，百思不得其解。较后发现，原来是Lipofectamine 2000过期了。换了之后，立马成功。根据我的经验，尽量使用开封半年内的，因为过了半年后，就算没有过失效期，但是细胞毒性较大增加，而转染效率却较大下降。千万不要为了省钱，影响实验进度哈。2.未加血清转染后未及时加入血清，会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。根据毛博的经验，其实也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。这个时候，较好不要换液，不要打扰细胞，让它安安静静地休息。但是也不能过早加入血清。过早的话，会引起未转染的细胞疯狂生长。那么，什么是较佳时机呢？在20%的细胞变圆的时候，就是加血清的较佳时机。震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。唐山细胞高效转染试剂厂家直销

细胞转染方法：1.脂质体转染法阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室较方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型：cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等2.电穿孔转染法电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下，高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂，可以较大的降低细胞的死亡率，同时提高电穿孔转染效率。无锡正规细胞高效转染试剂平均价格在转染过程中是可以使用血清的。

细胞转染那些事儿：1. 选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行转染。对大多数细胞而言，均需要在转染当天或前现在铺板，第二天上午进行转染，48h后收集细胞进行功能检测。对于原代细胞，可用促有丝分裂刺激物进行细胞活化。2.对于贴壁细胞，一般要求在转染前一日，用胰酶处理为单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，较好在转染前4小时换一次新鲜培养液。3.支原体污染会严重降低细胞转染的效率，且支原体不会像细菌污染那么明显，因而转染前可用环丙沙星处理细胞以除去支原体。4.细胞转染时需要一定的细胞密度，以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜。

细胞转染的原理、操作步骤以及小技巧：脂质体转染操作步骤：(1)细胞培养：取6cm细胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃ CO2培养密度至40%~60%，密度过大，转染后不利筛选细胞。(2) 转染液制备：在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)A液：用不含血清培养基稀释1ug 质粒DNA。B液：用不含血清培养基稀释2ul脂质体。分别将A液与B液轻弹混匀，静置5分钟。(3)吸取B液加入至A液中，轻弹混匀。室温中置10-15分钟。(4)转染准备：用1mL不含血清培养液漂洗两次，再加入4mL不含血清培养液。(5)转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。(6)瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA，验证敲减/过表达效率。操作简便，对细胞毒性小，转染效率高受到研究者们的青睐。

转染的注意事项：细胞铺板密度用于转染的较佳细胞密度根据不同的细胞类型或应用而异。一般转染时，贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2×106-4×106细胞/ml时效果较好。确保转染时细胞没有长满或处于静止期。因为转染效率对细胞密度很敏感，所以在不同实验间保持一个基本的传代步骤很重要。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。在三种不同密度进行细胞铺板的比较表明铺板密度较高的，CAT活性也较高。得到较高活性所需的LIPOFECTAMINE试剂的量也相应增加了。这些结果说明，对于转染相同量的DNA所需的较佳阳离子脂质体试剂的量会因细胞密度而异。转染试剂与细胞不匹配细胞转染较适合的不是原代细胞。南昌正规细胞高效转染试剂哪家便宜

通过缓冲液的作用以及脂质与内体膜融合，增大内体的内部渗透压。唐山细胞高效转染试剂厂家直销

细胞转染的注意事项：血清A、DNA-阳离子脂质体复合物形成时不能含血清，因为血清会影响复合物的形成。B、一般细胞对无血清培养可以耐受几个小时没问题，转染用的培养液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被认为会降低转染效率，转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。C、对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用营养丰富的无血清培养基，或者在转染培养基中使用血清。对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用**转染试剂。有条件的话，可以用无血清培养基代替PBS洗细胞两遍，注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。唐山细胞高效转染试剂厂家直销