青岛细胞高效转染试剂

细胞转染操作方法：转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种细菌介导的转染技术。理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。细菌介导的转染技术，是目前转染效率较高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，细菌转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。脂质体转染法阳离子脂质体表面带正电荷。青岛细胞高效转染试剂

细胞转染为什么不能加血清：传统的转染试剂一般会增加细胞的通透性，这样会把血清中的成分带入细胞，造成细胞毒性。阳离子脂质体，转染的过程是带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。同时，也会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基，转染后 4-6h在更换成有血清培养基，这其实是为了减轻转染造成的细胞毒性和转染效率的降低。厦门细胞高效转染试剂报价当复合物接近细胞膜时，通过内吞作用形成内体进入细胞。

细胞转染为什么不能加血清：不同的细胞及转染试剂要求转染的条件是不同 的。较好是在靠前次实验前做一个预实验，比如：HeLa，293，CHO，COS7， MCF－7，HepG2等细胞，是否加血清，对不同的细胞是有不同的影响的，有些细胞是可以有血清的，有些加血清就会受影响。转染后在6小时左右较好换液且换为有血清的培养基，其一因为普通转染试剂对细胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的细胞的死亡。转染时不加血清是防止血清的干扰作用，转染后可适时加入。加入过早会引起未转染细胞的优势生长，过晚会引起较多细胞死亡。可实时观察1/5细胞变圆的时候加入血清。

如何高效率实现细胞转染：阳离子脂质体转染试剂脂质转染试剂，以其适用宿主范围广，操作简便，对细胞毒性小，转染效率高受到研究者们的青睐。脂质体（liposome）是一种人工膜，在水相中形成具有双分子层结构的球形封闭囊泡。脂质体可以和带负电荷的核酸结合后重新形成复合物，当复合物接近细胞膜时，通过内吞作用形成内体（endosomes）进入细胞，通过缓冲液的作用以及脂质与内体膜融合，增大内体的内部渗透压，使内体结构破坏，释放出核酸。随后DNA复合物被释放进入细胞核内。对于普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。利用脂质体转染法较重要的就是防止其毒性，因此脂质体与质粒的比例，细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要因素，通过实验优化合适的转染条件对于转染效率的提高很重要。由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。

细胞转染：(1)转染试剂的准备A.将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。B.震荡后将试剂放在-20摄氏度保存，使用前还需震荡，。(2)选择合适的混合比例(1：1-1：2/脂质体体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。(3)将混合液在室温放置10—15分钟。(4)吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。(5)加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。(6)到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24-48小时。必须通过对药物的抗性筛选进行扩增或通过表型变化进行鉴定。苏州细胞高效转染试剂产品介绍

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转染方式：细胞由带负电荷的磷脂双分子层构成，这对大分子物质来说是个不可透过的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架，其也带负电荷。为了使核酸穿过细胞膜，研究人员开发了多种技术，大致分为三类：化学方法---利用载体分子包被核酸使其呈现中性电荷或正电荷。生物方法---利用基因工程细菌转染非细菌基因到细胞中。物理方法---在细胞膜表面产生一个瞬时的孔从而导入DNA。然而，没有一种方法适用于所有的细胞和实验，理想的方法应根据您的细胞类型和实验需要进行选择，理想的方法应具有高转染效率，低细胞毒性和对正常生理学的影响较小，并且易于使用和可重复性等特点。青岛细胞高效转染试剂

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