南京正规细胞高效转染试剂推荐厂家

DNA细胞转染步骤：1.提前现在细胞铺板 提前现在将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞密度在60％左右为宜。2.转染过程⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。 注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。⑵将2μlEntransterTM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释，充分混匀，制成EntransterTM-H4000稀释液。室温静置5分钟。⑶将EntransterTM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中，充分混匀（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上），室温静置15分钟。转染复合物制备完成。⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上，轻柔混匀。 注意：①对本试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。②完全培养基可加物品。因为DNA摄入效率和表达水平在不同实验中差异较大，实验必须很小心。南京正规细胞高效转染试剂推荐厂家

细胞转染效率低下的几个大坑：1.准备不足做脂质体转染的时候，在开展正式实验前要多做预试验，优化转染条件。优化转染条件包括：脂质体的用量、DNA密度、细胞密度、脂质体和DNA混合孵育时间等等。2.电压过大做电转的时候，如果电压太大，往往会发生细胞大量死亡的情况。不同的细胞，需要的电压是不一样的。这就要求我们多做预实验，多摸索条件。对于大多数细胞来说，其较佳电压位于250-1250v/cm。另外，就是进行转染的细胞应该处于对数生长期。处于对数生长期的细胞的抗损伤能力是较强的。细胞浓度应该处于5x106到1x107／mL之间。每次转染的质粒应该控制在4-6 μg，如果﹥10μg，转染效率也较大降低。电击后，应该将DNA和细胞混合液在室温下放置10分钟，使细胞恢复损伤。石家庄正规细胞高效转染试剂产品介绍通过缓冲液的作用以及脂质与内体膜融合，增大内体的内部渗透压。

转染的注意事项：有血清时的转染 血清一度曾被认为会降低转染效率，但只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，在转染过程中是可以使用血清的。转染过程在两步中需要使用培养基做为稀释液：在DNA-阳离子脂质体复合物准备过程以及复合物同细胞接触过程。在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成。但在复合物形成后，在加入细胞中前可以加入血清。阳离子脂质体和DNA的较佳量在使用血清时会有所不同，因此如果你想在转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康。对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用一些营养丰富的无血清培养基，或者在转染培养基中使用血清。

瞬时转染和转染效率的监测：基因的瞬时表达在24-72小时内就结束了。这种快速的瞬时表达非常适用于验证质粒表达和监测转染步骤的效率。可以使用报告基因来确定优化条件，其表达蛋白易检测，在目的细胞中不含此蛋白或水平很低。常用的报告基因包括氯霉素乙酰转移酶（CAT），绿色荧光蛋白（GFP），荧光素酶（Lux或Luc）以及b- 半乳糖苷酶（b-gal）。可以使用简单的非同位素方法检测b-gal的表达以测定转染效率和活性。pCMV SPORT- bgal质粒包含CMV启动子调控下的LacZ基因，转染入真核细胞内后可以直接表达bgal。结合简单的检测步骤，可以做为监测转染条件的一种方便灵敏的方法。表达水平与位臵无关，不会受到周围染色体元件的影响。

细胞转染为什么不能加血清：不同的细胞及转染试剂要求转染的条件是不同 的。较好是在靠前次实验前做一个预实验，比如：HeLa，293，CHO，COS7， MCF－7，HepG2等细胞，是否加血清，对不同的细胞是有不同的影响的，有些细胞是可以有血清的，有些加血清就会受影响。转染后在6小时左右较好换液且换为有血清的培养基，其一因为普通转染试剂对细胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的细胞的死亡。转染时不加血清是防止血清的干扰作用，转染后可适时加入。加入过早会引起未转染细胞的优势生长，过晚会引起较多细胞死亡。可实时观察1/5细胞变圆的时候加入血清。建议选择50%~80%区间密度进行细胞转染。合肥正规细胞高效转染试剂生产厂家

直到外源基因在细胞分裂过程中因各种因素丢失为止。南京正规细胞高效转染试剂推荐厂家

细胞转染效率低下的几个大坑：1. 细胞污染细胞污染也是造成细胞死亡，转染效率低下的一大原因。首先，转染细胞用的质粒必须保证无菌。而现在市场上的一般的质粒提取试剂盒都做不到较全无菌。毛博这里再贡献一个独门绝招：将提完质粒后或者提的较后一步，用75％乙醇沉淀，这样就除菌了。2.质粒不行转染用的质粒首先要保证数量，一般为2 μg以上。质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他对细胞有毒害作用的物质，也会影响转染效率。这个时候，就应该对质粒进行纯化和浓缩。南京正规细胞高效转染试剂推荐厂家

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