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分离纯化多肽的常用方法-分子排阻色谱 SEC 是利用多肽分子大小、形状差异来分离纯化多肽物质,特别对一些较大的聚集态的分子更为方便,如人重组生长(hgH)的分离,不同结构、构型的GH 在SEC 柱上分离行为完全不同,从而可分离不同构型或在氨基酸序列上有微小差异的变异体,利用SEC 研究修饰化的PEG 的分离方法,此PEC 具有半衰期长、作用强的特点。一些分子量较大的肽或蛋白均可利用此法分离分析。 分离纯化多肽的常用方法--离子交换色谱 IEXC 可在中性条件下,利用多肽的带电性不同分离纯化具有生物活性的多肽。其可分为阳离子柱与阴离子柱两大类,还有一些新型树脂,如大孔型树脂、均孔型树脂、离子交换纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶树脂等。在多肽类物质的分离分析研究中,对多肽的性质、洗脱剂、洗脱条件的研究较多,不同的多肽分离条件有所不同,特别是洗脱剂的离子强度、盐浓度等对纯化影响较大。Wu 等报道利用离子交换柱层析法,探讨分离牛碳酸酐异构体和牛血清白蛋白、鸡血清白蛋白酶的提取条件,获得了有价值的数据供今后此类物质分离研究。广州多肽分离填料销售厂家

分离纯化多肽的常用方法-疏水作用色谱 HIC 是利用多肽中含有疏水基因,可与固定相之间产生疏水作用而达到分离分析的目的,其比RP-GPLC 具有较少使多肽变性的特点。利用GIC 分离生产(GH)产品的结构与活性比EP-GPLC 分离的要稳定,活性较稳定。Geng 等利用HIC 柱的低变性特点,将大肠杆菌表达出的经盐酸胍乙啶变性得到人重组干扰素-γ。通过HIC 柱纯化、折叠出高生物活性的产品。不同人尿表皮生长因子(EGF)也利用HIC 纯化到了,均具有良好的生物活性。HIC 可将未经离子交换柱的样品纯化。而RP-HPLC 则不能达到这一要求。广州多肽分离填料销售厂家

分离纯化多肽的常用方法-置换色谱 HPDC 是利用小分子置换剂来交换色谱柱上的样品,从而达到分离的目的。它具有分离组分含量较少成分的特性。利用HPDC 鉴定分离了低于总量1% 组分的活性人重组生长(rHG )。在研究非毒**换剂时Jayarama 发现化葡萄糖(Detran Sulfate,DS)是对β 乳球蛋白A 和B 的良好置换剂,一般DS 的相对分子质量为1×104 和4×104 **宜。研究表明置换剂的相对分子质量越低,越易于与固定相结合,因此在分离相对分子质量小的多肽时,需要更小的置换剂才能将其置换纯化出来。

分离纯化多肽的常用方法-反相高效液相色谱 结果与保留值之间的关系:利用RP-HPLC 分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。为了获得一系列的保留系数,Wilce 等利用多线性回归方法对2106 种肽的保留性质与结构进行分析,得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系,其中极性氨基酸残基在2~20 氨基酸组成的肽中,可减少在柱上的保留时间;在10~60 氨基酸组成的肽中,非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间,而含5~25 个氨基酸的小肽中,非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间。 同时有不少文献报道了肽链长度、氨基酸组成、温度等条件对保留情况的影响,并利用计算机处理分析得到每种多肽的分离提取的比较好条件。 肽图分析(Peptide Mapping):肽图分析是根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点,使用专一性较强的蛋白水解酶[ 一般未肽链内切酶(endopeptidase)]作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断,通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱,肽图分析对多肽结构研究合特性鉴别具有重要意义。

分离纯化多肽的常用方法-高效液相色谱(HPLC) HPLC 的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段,因为蛋白质、多肽的HPLC 应用与其它化合物相比,在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的,更重要的是HPLC 能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。因此在寻找多肽类物质分离制备的比较好条件上,不少学者做了大量的工作。如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。海博纳新材料科技(苏州)有限公司欢迎来电广州多肽分离填料销售厂家

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分离纯化多肽的常用方法-膜蛋白色谱 CMP+分离强蔬水性蛋白、多肽混合物的层析系统,一般有去垢剂(如SDS)溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白,并由羟基磷灰石为固定相的柱子分离纯化。羟基磷灰石柱具有阴离子磷酸基团(P-端),又具有阳离子钙(C-端),与固定相结合主要决定于膜蛋白的大小、SDS 结合量有关。利用原子散射法研究cAMP的分离机制发现,样品与SDS 结合后在离子交换柱上存在SDS 分子、带电荷氨基酸与固定相中带电离子间的交换,从而达到分级分离的目的。广州多肽分离填料销售厂家

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