CRT(Calreticulin)免疫荧光检查

免疫荧光Coons等于1941年初次采用荧光素进行标记而获得成功。这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术。用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。这两种方法总称免疫荧光技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。以荧光抗体方法较常用。用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。使用已知荧光抗原标记物质来检查相应抗体的方法被称为荧光抗原技术。CRT(Calreticulin)免疫荧光检查

荧光标记二抗的选择普遍；与使用荧光素结合一抗的检测相比，成本较低。间接免疫荧光的缺点：由于需要具有两种不同物种反应性的两种抗体，因此物种交叉反应性问题增加；与直接免疫荧光相比，时间更长（操作步骤更多）。间接免疫荧光的优点：通过增加能够与一抗结合的二抗数量进行信号放大；与直接免疫荧光相比，通过信号放大提高检测灵敏度；荧光标记二抗的选择普遍；与使用荧光素结合一抗的检测相比，成本较低。间接免疫荧光的缺点：由于需要具有两种不同物种反应性的两种抗体，因此物种交叉反应性问题增加；与直接免疫荧光相比，时间更长（操作步骤更多）。TLR4免疫荧光试验免疫荧光技术可以用于研究植物病理学和农业生产。

免疫荧光的制作：样品准备（贴壁细胞、悬浮细胞以及组织等）：对于贴壁细胞：先将洁净的盖玻片在70%乙醇中进行浸泡处理，然后用干净无菌的镊子放置到培养皿中，用无菌PBS洗去残留的乙醇。待细胞接近长成单层后取出盖玻片，操作小心，防止细胞脱片。对于悬浮细胞：有2种方法，①先在悬浮液中进行固定步骤，然后把细胞滴加在载玻片上，干燥后细胞会紧贴在载玻片上。②先在悬浮液中进行固定和染色步骤，离心洗脱，然后用移液管移至盒式玻片进行后续染色步骤。对于冷冻切片：切片放置在载玻片上后，可以直接进行固定等后续操作。对于石蜡切片：免疫荧光中石蜡切片较少，要先进行脱蜡和抗原修复处理。

细胞免疫荧光主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导，细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合，原理就是利用抗原-抗体反应之后，采用荧光标记，标记完成后，显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少，从而做出一个定位研究，也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导，细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速度快的特点，是目前比较常用的组织学技术，也是比较精确的。免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，荧光显微镜下即可观察到荧光。在实际工作中，荧光抗原技术应用较少，因此通常将其称为荧光抗体技术或免疫荧光技术。

免疫荧光-实验步骤：细胞爬片免疫荧光：在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次5min;（圆盖片：13mm24孔；18mm12孔；20mm6孔）用4%的多聚甲醛固定爬片15min,PBS浸洗玻片3次,每次5min0.5%TritonX-100(PBS配制)室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);PBS浸洗玻片3次,每次3min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加3%的BSA（PBS配置）,室温封闭30min5,吸水纸吸掉封闭液,不洗,每张玻片滴加足够量用PBS稀释好的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜。加荧光二抗:PBS浸洗爬片3次,每次5min,吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中室温孵育50min。免疫荧光技术是一种以荧光素标记抗体来定位抗原物质的高度发达的标记免疫技术。OPN免疫荧光IF

免疫荧光技术中，以荧光物质标记抗体来定位抗原物质的方法被称为荧光抗体技术。CRT(Calreticulin)免疫荧光检查

细胞免疫荧光可以观察蛋白在细胞中的定位，以及一些特殊信号分子蛋白的出核/入核的定位变化。在进行细胞免疫荧光过程中，需要用到细胞爬片，通过将爬片浸在细胞培养基内，细胞在爬片上生长，进而进行细胞的免疫荧光。实验前准备：1.胰酶;2.DMEM细胞培养基;3.细胞培养12孔板或者6孔板;4.爬片。间接免疫荧光的优点：通过增加能够与一抗结合的二抗数量进行信号放大；与直接免疫荧光相比，通过信号放大提高检测灵敏度。免疫荧光技术是一种以荧光素标记抗体来定位抗原物质的高度发达的标记免疫技术。CRT(Calreticulin)免疫荧光检查

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