MMP2免疫荧光试验

细胞的固定及免疫荧光：吸去一抗，使用PBS浸洗 3 次，每次 5 min。向孔内滴加足够量适宜浓度的二抗，37℃，室温避光孵育1小时。注意二抗带有荧光素标记，因此操作过程尽量在暗处进行。吸去二抗，使用PBS浸洗 3 次，每次 5 min。向玻片上滴加DAPI，或者Hoechst复染细胞核，一般为蓝色荧光；避光孵育5-10min。使用PBS轻洗细胞3 次，每次 5 min，洗去多余的DAPI。取爬片时由于爬片与培养皿底结合较紧，张力较大，可将注射器针头针尖向背面做个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出即可。用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，注意将爬片反过来贴于多聚赖氨酸载玻片上，然后在荧光显微镜下观察并采集图像，注意选择抗体对应的激发光源。免疫荧光技术可以用于研究免疫系统的功能和异常。MMP2免疫荧光试验

荧光抗体技术：抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果的检测方法。免疫荧光测定：抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法。免疫荧光实验步骤：直接法测抗原：基本原理：将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。MMP2免疫荧光试验免疫荧光技术是将抗体与荧光素等示踪物质结合，通过抗原抗体反应进行定位。

免疫荧光注意事项：对照实验的设置：1、内源性组织背景对照：某些细胞和组织可能有固有的生物学性质，会产生背景荧光，对结果产生影响，例如色素脂褐质。因此在孵育一抗前，应对样品进行观察，确保抗原本身没有信号。2、阳性对照：用确认含有待测抗原的组织或细胞，与待测标本进行统一处理，结果应为阳性，可证明待测抗原有一定活性并且实验过程中用的试剂及方法均可靠。3、阴性对照：与阳性对照相反，用明确不含有待测抗原的细胞或组织切片染色，结果若为阴性，可排除染色过程中由于非特异性染色造成的假阳性结果。

细胞免疫荧光步骤是什么呢？步骤：1. 细胞一定要贴在玻片上（较好可以放入24孔板），为后面照像打基础。细胞密度适中，大约60-75%满片即可，否则容易脱片。2. 取出细胞后用4%多聚甲醛固定15分钟，现用现配。（以下各步骤切毋使玻片干燥）3. PBS冲洗；4. 0.1%Triton作用20分钟；5. PBS冲洗；6. 10%正常血清封闭10分钟；7. 加入一抗，4度孵育过夜（找个小瓶盖将小玻片支起来，抗体就不容易溢出），还要记住“砸片”，就是抗体从较高处落到片子上，以分布均匀。抗体稀释度1：60，较常用！8. PBS冲洗4次，各5分钟；9加入荧光二抗，室温30分钟。抗体稀释度1：400，较常用！10. 90%甘油封片。也很关键阿，多封几次才有体会。12. 避光保存，或到显微镜下观察。免疫荧光技术是一种利用荧光物质标记抗体来定位抗原的技术。

免疫荧光技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。与放射免疫法相比，荧光免疫法无放射性污染，并且大多操作简便，便于推广。国外生产的TDM用试剂盒，有相当一部分即属于此类，并且还有TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。由于一般荧光测定中的本底较高等问题，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。新发展了几种特殊的荧光免疫测定，与酶免疫测定和放射免疫分析一样，在临床检验中应用。使用荧光抗体方法是免疫荧光技术中常见的操作步骤。S100A4免疫荧光

荧光抗体技术可用于检测和定位各种抗原，也可以用于检测和定位抗体。MMP2免疫荧光试验

检测复杂的生物学结构需要较高清晰度的荧光信号，并将荧光信号从背景噪声中分离开来。标准的免疫荧光标记很少能够获得较佳信噪比的成像效果。获得良好图片和较佳的可供发表的高质量图像之间的差异就在于：需要精细调整样品信号达到峰值特异性、高清晰度和较佳放大倍数。虽然荧光基团是进行高质量细胞成像的较佳选择，但不可避免地也极易发生光漂白，即荧光信号的光化学降解或衰退。任何光敏感度的下降都可能导致数据出现偏差，产生假性结果。抗淬灭封片剂可以保护荧光标记蛋白的稳定性，维持数周乃至数月的图像信号完整度。MMP2免疫荧光试验