经典的商品化培养基有很多种,其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是应用的培养基。其他如:M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。以下介绍10种常用的商品化细胞培养基以及常用的细胞完全培养基配置方法。1、BME细胞培养基基础Eagle培养基(BasalMediumEagle),1955年Eagle设计,BSS+12种氨基酸+谷氨酰胺+8种维生素。简单、便于添加,适于各种传代细胞系和特殊研究用,在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。2、MEM细胞培养基又称低限量Eagle培养基(MinimalEssentialMedium),1959年在Eagle's基础培养基(BME)上修改而来,删去赖氨酸、生物素,氨基酸浓度增加,适合多种细胞单层生长,有可高压灭菌品种,是一种基本、试用范围广的培养基,但因其营养成分所限,针对生产之特定细胞培养与表达时,并不一定是使用效果佳或者经济的培养基。 菩禾生物CRO企业提供符合标准规范的细胞资源、细胞培养基、细胞检测试剂盒和细胞培养设备。NIC-H1975完全培养基培养基公司
皮细胞是位于皮肤或腔道表层的细胞,形状有扁平,柱状等。构成皮肤的上皮细胞使皮下组织免受损伤,细菌侵入,危险化学物质的损害,并且避免机体过度失去水分。覆盖胰腺的上皮细胞会分泌酶促进消化;小肠上皮细胞会从消化的食物中吸收养分;呼吸道上皮细胞构成黏膜,这些黏膜能分泌黏液阻止吸入的细菌与病毒进入肺部。上皮细胞完全培养基包含上皮细胞所需的各种养分,无需添加任何成分,可直接用于人或其他动物上皮细胞的体外培养。经过长期测试,可维持上皮细胞比较好的生长状态。【适用范围】适用于培养各种上皮细胞,如乳腺上皮细胞(MCF-10A),人角膜上皮细胞(HCEpiC),人子宫内膜上皮细胞(hEEC),人输尿管上皮细胞(SV-HUC-1),大鼠肾小管上皮细胞(NRK)等。【使用方法】完全培养基从冰冻区中取出后(切勿直接将产品从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀),置于2℃~8℃中使之融化,解冻过程中间歇地轻轻摇晃均匀,待全部溶解后再分装或直接使用。融解后的完全培养基,建议其置于4℃冰箱存放并于1-2周内用完。 NIC-H1975完全培养基培养基公司菩禾按照5X103cells/cm2的细胞密度接种在预先用明胶包被的孔板中,每孔培养基600μl,37℃,5%CO2培养。
2)优点和缺点血清是非常复杂的混合物,成分多样,含有各种生理平衡的分子量差别很大的生物分子,有的对细胞生长有促进作用,如含有携带、矿物质、微量元素和脂类物质的转运蛋白等。血清能够提供细胞贴壁因子和扩散因子。血清中含有起稳定作用和的因子,能够维持培养基的pH值并抑制蛋白酶直接或间接的酶解。但是血清的加入也带来了很多问题:(1)血清的成份可能有几百种之多,目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难;(2)血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,从而使实验的标准化和连续性受到限制;(3)不能排除血清中含有易变物质,这被认为是“瓶中恶化”的原因之一。(4)对大多数细胞,在体内状态,血清不是它们接触的生理学液体,只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清,因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态,血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长。
)细胞培养用水一般为三蒸水(经石英蒸馏器蒸馏)或超纯水,医药生产上一般为注射用水。2)建议尽量选择与所用量相匹配的包装一次使用,因为包装一旦打开,组分可能会变质或因受潮而结团。3)溶解干粉培养基时先加入终体积90%-95%的培养用水,添加剂加完后再补足。4)如需添加的组分较多时,某一组分完全溶解后,再添加另一组分。5)待培养基完全溶解后再加入碳酸氢钠,以免产生沉淀。6)所有成分完全溶解后,培养基应立即过滤或高压除菌,以免产生沉淀或有微生物污染。7)在过滤除菌时,一般情况下应调pH比所需值低~,因过滤除菌后,pH值会升高约。8)在细胞培养过程中,建议不加或加少量的,如血清的浓度较低则所加的量也要相应降低一些。9)建议用1NHCl或1NNaOH来调节培养基的pH,因为用碳酸氢钠来调对培养液的渗透压影响比较大。,高压除菌及除菌。与过滤相比,高压灭菌的工作强度小,相对便宜,失败率低,但易造成营养成分的流失。 移除细胞培养液,每孔加入400μL 1号洗涤液清洗,弃液; 每孔加入300μL固定液,室温固定15-30min,弃液;
细胞培养液指细胞生长的液体环境,一般指完全培养液,添加了血清、水解乳蛋白、各种添加剂等可以直接使用的培养液。,因为大多数单独的培养基并不能提供细胞生长所需要的全部营养,如MEM培养基,较为常用的量为5%~10%的比例,而特殊的低血清培养基血清量可降至3%左右,细胞的形态和功能不受影响。,但在某些培养领域水解乳蛋白仍在使用,以补充培养液中缺乏的氨基酸、小肽物质。较为常用的方式是用汉氏(Hanks’BSS)或欧式(Earle’sBSS)平衡液溶解水解乳蛋白(一般为5‰浓度),即成乳汉(欧)液,再与化学合成培养基(一般为MEM)按比例混合使用(如1:1)。(生长因子等)模式成分复杂的培养基还含有许多化合物,包括蛋白质、多肽、核苷、柠檬酸循环的中间产物、酸及脂类等。已发现当培养基中的血清浓度减少时,这些成分都是必需的。既使在使用血清的情况下,这些成分也可帮助细胞的克隆化培养及维持某些特殊细胞系的生长。和生长因子在大多数常规培养基的配方中都没有注明,但在无血清培养基中通常要加入它们,用其来代替血清中的能增加多种不同类型细胞的贴瓶率;生长因子包括FGF家族、EGF、PDGF、IGF-1和IGF-2及白介素等,生长因子和细胞因子有着的特异性。 1、产品中血清已经过严格筛选,更适合细胞的生长需求。NIC-H1975完全培养基培养基公司
待细胞融合度达到60-70%,开始诱导,小心弃去原有培养基,并小心沿壁加入37℃预热的成骨诱导分化培养基。NIC-H1975完全培养基培养基公司
人胰腺星状细胞完全培养基原代细胞与细胞系有什么区别?根据传统定义,收获和接种的细胞被称为原代细胞[Freshney,.(1987)..(NewYork,.)].这类细胞直接从组织分离,生命周期有限,经数次传代后会逐渐停止生长。原代细胞在有限的生命周期内需掌握好细胞的生长空间,以保持细胞群中基因型和表型的一致性。少数生长缓慢的细菌可在其内放置一杯水人胰腺星状细胞完全培养基细胞系是不断生长、分化的细胞群,因其经过遗传改造,致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。人胰腺星状细胞完全培养基倍增和代数有什么区别?倍增是培养物中细胞总数的翻倍,通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出,传代培养过程的次数,传代培养的目的,是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。倾注培养法此法适用于乳汁和尿液等液体标本的细菌计数对病料中可能含有的病原菌作初步的估价人胰腺星状细胞完全培养基接收到的冻存细胞该如何处理?收到包装箱后,立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快,以避免升温。不要将细胞储存在-80℃,这样会对细胞造成不可挽回的伤害。NIC-H1975完全培养基培养基公司
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