bcl-2免疫抗体

荧光抗体技术：抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果的检测方法。免疫荧光测定：抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法。免疫荧光实验步骤：直接法测抗原：基本原理：将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。荧光抗原法是利用已知的荧光标记物来追踪或检查相应抗体的方法。bcl-2免疫抗体

荧光色素：四甲基异硫氰酸罗丹明（tetramethylrhodamineisothiocyanate，TRITC）结构式如下：较大吸引光波长为550nm，较大发射光波长为620nm，呈橙红色荧光。与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。其异硫氰基可与蛋白质结合，但荧光效率较低。免疫荧光技术又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展较早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。bcl-2免疫抗体免疫荧光技术可以用于研究内脏移植和免疫抑制。

荧光的产生：一此化学物质能从外界吸收并储存能量（如光能、化学能等）而进入激发态，当其从激发态再回复到基态时，过剩的能量可以电磁辐射的形式放射（即发光）。荧光发射的特点是：可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光；而一旦停止供能，发光（荧光）现象也随之在瞬间内消失。可以引起发荧光的能量种类很多，由光激发所引起的荧光称为致荧光。由化学应所引起的称为化学荧光，由X线或阴极射线引起的分别称为X线荧光或阴极射线荧光。荧光免疫技术一般应用致荧光物质进行标记。

细胞免疫荧光主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导，细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合，原理就是利用抗原-抗体反应之后，采用荧光标记，标记完成后，显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少，从而做出一个定位研究，也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导，细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速度快的特点，是目前比较常用的组织学技术，也是比较精确的。免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，荧光显微镜下即可观察到荧光。免疫荧光技术可以用于研究免疫系统的功能和异常。

免疫荧光间接法：如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗体—抗原—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为一抗体，其它步骤的抗原检查相同。标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于任何抗原的诊断。免疫荧光技术可以用于研究细胞凋亡和细胞存活。bcl-2免疫抗体

荧光抗体技术可以用于检测和定位细胞或组织中的特定抗原物质。bcl-2免疫抗体

zo-1的免疫荧光，步骤如下：1.细胞在盖片上生长融合到95%-100%时，从孵箱中取出。2.用预温的1×PBS洗3次，每次10分钟。3.4%的甲醛室温固定20-30分钟。4.1×PBS洗3次，每次10分钟。5.0.2%TritonX-100透化2-5分钟。6.1×PBS洗3次，每次10分钟。7.5%BSA室温封闭30分钟。8.加一抗（用1%BSA稀释）放在湿盒里，4度过夜。9.1×PBS洗3次，每次10分钟。10.加二抗(用1%BSA稀释)30分钟，闭光。11.1×PBS洗3次，每次10分钟。12.95%甘油封片。注：4%甲醛，0.2%Triton，5%BSA均用1×PBS稀释。bcl-2免疫抗体