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荧光色素:四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate,TRITC),其结构式如下所示,比较大吸收光波长为 550nm,比较大发射光波长为 620nm,呈现出橙红色荧光。和 FITC 的翠绿色荧光形成鲜明对比,能够配合用于双重标记或者对比染色。它的异硫氰基能够和蛋白质相结合,不过荧光效率比较低。免疫荧光技术也被称作荧光抗体技术,属于标记免疫技术中发展相对较早的一种。很早的时候就有一些学者尝试把抗体分子与某些示踪物质进行结合,借助抗原抗体反应来对组织或细胞内的抗原物质进行定位,而该技术就是在此基础上建立起来的一项技术。免疫荧光技术可以用于研究食品安全和生物安全。OPG免疫荧光IF

OPG免疫荧光IF,免疫

免疫荧光使细胞间相互作用可视化,为研究细胞群体之间的关系打开了新的窗口。在免疫细胞与靶细胞的相互作用研究中,免疫荧光技术发挥着重要作用。例如,在病毒***过程中,免疫细胞会识别并攻击被病毒***的靶细胞。通过分别标记免疫细胞和靶细胞上的特定标志物,在共聚焦显微镜下可以观察到免疫细胞如何接近、识别和杀伤靶细胞。这种可视化的研究有助于深入理解免疫应答的机制,为开发新型免疫疗法提供理论依据。在组织工程领域,免疫荧光可用于研究植入细胞与宿主组织细胞之间的相互作用。当植入新的细胞或组织构建体到受损组织时,通过免疫荧光标记植入细胞和宿主细胞的不同标志物,能够观察到它们之间是否存在融合、信号传递等相互作用,从而评估组织工程修复的效果。Aggrecan免疫荧光染色免疫荧光技术可以用于研究遗传疾病和基因表达调控。

OPG免疫荧光IF,免疫

在肾小球肾炎的研究中,不同类型的肾小球肾炎具有不同的免疫病理特征。多重免疫组化可以同时检测肾小球内的多种免疫球蛋白和补体成分。例如,在 IgA 肾病中,可以标记 IgA、补体 C3 以及肾小球系膜细胞的标志物。通过观察这些标志物在肾小球内的沉积部位、分布模式以及相互关系,可以准确诊断 IgA 肾病,并与其他类型的肾小球肾炎,如膜性肾病(可标记 IgG、C3 等)进行区分。同时,还可以标记与肾脏炎症反应相关的细胞因子,如白细胞介素 - 6(IL - 6)和肿瘤坏死因子 - α(TNF - α),研究这些细胞因子在肾小球肾炎发病机制中的作用,例如它们是如何促进肾小球内炎症细胞的浸润和细胞外基质的沉积的。

免疫荧光的原理和类型:免疫荧光利用荧光分子或荧光团在一定波长(分子的吸收光谱)下吸收光子的特性,经过短暂的间隔(发射光谱)后以较高的波长发射光子,并伴随能量损失。发射的荧光可通过显微镜观察到。荧光团可以通过可见光或紫外光激发。具有高光稳定性和荧光量子产率的荧光染料可在市场上购买,其激发较大值跨越从400到>700nm的波长范围。它们不会损伤活细胞,可安全用于生物制剂。在进行免疫荧光检测时,首先对细胞或组织进行固定和透化处理。进行免疫染色时,荧光团与目标抗原的抗体结合,然后使用成像显微镜观察荧光信号。根据使用的抗体和所需的信号扩增,免疫荧光可分为直接和间接两种类型。免疫荧光技术在免疫学研究中发挥重要作用,帮助揭示细胞和分子的功能和相互关系。

OPG免疫荧光IF,免疫

在视网膜疾病的研究中,视网膜是一个结构复杂且功能精细的组织。例如在年龄相关性黄斑变性(AMD)的研究中,我们可以用不同颜色的荧光标记视网膜色素上皮细胞、光感受器细胞、血管内皮细胞以及与疾病相关的生物分子。如用绿色荧光标记视网膜色素上皮细胞中的视黄醛结合蛋白,红色荧光标记光感受器细胞中的视锥视杆细胞连接蛋白,蓝色荧光标记血管内皮生长因子(VEGF)。通过这种方式,可以在视网膜组织切片上直观地看到AMD发病过程中这些细胞和分子的变化,如视网膜色素上皮细胞的萎缩、光感受器细胞的损伤以及新生血管的形成与VEGF的关系。在青光眼的研究中,多色免疫荧光可用于标记视神经**的神经纤维、筛板组织以及眼压相关的分子。用一种颜色标记神经纤维,另一种颜色标记筛板细胞,再用其他颜色标记与眼压调节有关的蛋白。这样可以观察到青光眼患者视神经**结构的改变、神经纤维的损伤与眼压变化之间的关系,有助于提高青光眼诊断的准确性并深入理解其发病机制。在实际工作中,荧光抗原技术应用较少,因此通常将其称为荧光抗体技术或免疫荧光技术。OPG免疫荧光IF

免疫荧光技术可以用于研究神经系统的功能和疾病。OPG免疫荧光IF

在系统性红斑狼疮(SLE)的研究中,多重免疫组化有助于揭示疾病的多系统损害机制。可以标记皮肤组织中的自身抗体标志物,如抗核抗体(ANA)的抗原,同时标记皮肤细胞的标志物,如角蛋白,以及皮肤中的免疫细胞标志物,如 CD4 + T 细胞、朗格汉斯细胞等。在肾脏组织中,可以标记抗双链 DNA 抗体(dsDNA)的抗原,同时标记肾小球细胞标志物,如足细胞蛋白,以及肾内免疫细胞标志物,如 CD8 + T 细胞、巨噬细胞等。SLE 患者的自身抗体可累及多个系统,通过观察这些标志物在不同组织中的分布和相互关系,可以了解自身抗体是如何与组织细胞结合,引发免疫炎症反应,进而导致皮肤红斑、肾脏损害等多系统病变的。OPG免疫荧光IF

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MYeloperoxidase免疫组化 2024-09-19

直接免疫荧光:单抗体(一抗)用于免疫染色和检测目标蛋白。荧光素结合的一抗直接与目标抗原结合,并使用成像显微镜观察。直接免疫荧光的优点:由于无需为两种抗体选择不同的物种反应性,从而降低了物种交叉反应性问题。与间接免疫荧光相比,时间缩短(操作步骤减少)。直接免疫荧光的缺点:不允许通过二抗进行信号放大;检测灵敏度降低;荧光素结合一抗的选择有限;与使用荧光二抗的检测相比,更昂贵。间接免疫荧光:使用两种抗体(一抗和二抗)进行免疫染色并检测目标蛋白。首先,用特异性一抗标记目标蛋白。然后,荧光素结合的二抗(与一抗具有不同的物种反应性)识别结合的抗原-抗体复合物并与一抗结合。由于一个以上的二抗可以与一抗结合,...

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