铜绿假单胞菌进行传代保存时,培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于较适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。铜绿假单胞菌主要用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或疗养,非药用,非食用。主要用途有抗抵菌防腐剂的检测、抗微生物效力测试、培养基测试、非无菌产品的控制菌测试、质量控制菌株,无菌测试、产鼠李糖脂表面活性剂、药品和个人护理用品检测。通常采用冷冻干燥管保藏。与特异性有密切关系。标本可取创面渗出物、脓汁、尿、血等。分离培养,根据菌落特征、色素以及生化反应予以鉴定。必要时可用血清学试验确诊。部分人群体内铜绿假单胞菌滋生会使尿液呈绿色。铜绿假单胞菌为条件致病菌,常见于烧伤科影响等症,因此絮用纤维等纤维产品标准中规定不得检出铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌主要产生青色的色素。黑白轮枝孢
铜绿假单胞菌含有O抗原(菌体抗原)以及H抗原(鞭毛抗原)。O抗原包含两种成分:一种是其外膜蛋白,为保护性抗原;另一种是脂多糖,有特异性。O抗原可用以分型。铜绿假单胞菌的标本采集,分别来自不同影响部位的各种标本,包括血液、尿液、痰标本、脓汁、穿刺液等。还包括来自医院环境中的各种标本如水、空气、物体表面采样等。通过染色镜检,铜绿假单胞菌为革兰阴性杆菌,菌体大小(1.5~5.0)um×宽(0.5~1)um,细长且长短不一,有时呈球杆状或线状,成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛,无芽胞,无荚膜。泰国指孢囊菌金黄色葡萄球需要干冰运输,-80度保存。
铜绿假单胞杆菌在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130摄氏度以下的低温中能减少冰晶的形成。细胞复苏时速度要快,使之迅速通过细胞较容易受损的-5~0摄氏度,细胞仍能生长,活力受损不大目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。合适的铜绿假单胞杆菌温度通常在45~68摄氏度之间(预备实验可2摄氏度间隔进行)。另外,由于在60~68摄氏度间,也有很高的活性,因此可在此温度范围内设定铜绿假单胞杆菌温度,进行2StepPCR。铜绿假单胞杆菌温度为68摄氏度时,每kbp大体可设定30秒~1分钟;当温度设定在68摄氏度以下时,时间设定可稍长一些。
铜绿假单胞菌的生长对营养要求不高。对有正常菌群存在的临床标本或采自环境中的标本应接种选择性培养基如麦康凯琼脂培养基(MAC);对无正常菌群存在的临床标本如血液、脑脊液、穿刺液等可接种普通全营养型培养基(如TSA、PCA、营养琼脂}或血琼脂培养基、铜绿假单胞菌培养基。普通琼脂培养基上生长18~24h可以见到扁平、湿润的菌落,该菌所产生的带荧光的水溶性青脓素与绿脓素相结合将使得培养基呈亮绿色;在血琼脂平板上生长时可以见到在菌落的周围有溶血环,菌落呈金属光泽;在铜绿假单胞菌培养基上呈蓝绿色或者红褐色菌落,365nm紫外灯下显荧光。如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长,在液体表面形成菌落,而在培养基底部细菌的生长不良。铜绿假单胞菌中的原内毒养素蛋白质不只存在于不同血清型铜绿假单胞菌中。
金黄色葡萄球菌的分类与分型:根据生化反应和表皮葡萄球菌产生色素不同,可分为金黄色葡萄球菌(S、表皮葡萄球菌(S和腐生葡萄球菌(S三种。其中金黄色葡萄球菌多为致病菌,表皮葡萄球菌偶尔致病,腐生葡萄球菌一般不致病。60%~70%的金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解,表皮葡萄球菌不敏感。用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。肠有害元素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起,Ⅱ群菌对维生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。造成医院传染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。枯草芽孢杆菌的芽孢形成后菌体不膨大。关节炎诺卡氏菌菌种
枯草芽孢杆菌能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素。黑白轮枝孢
复苏后的铜绿假单胞菌菌种在传1-2代后使用。暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4摄氏度中保藏。铜绿假单胞菌特别注意事项:微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时与烜雅联系或更换新的菌种。铜绿假单胞菌培养保藏法,培养后于4—6摄氏度冰箱内保存。培养温度为35-37摄氏度。黑白轮枝孢
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