白的免疫检测:SNAP i.d.“ 2.0系统与SNAP 1.d.系统(首先代)与标准免疫检测一种。 SNAPi.d。 2.0蛋白质检测b。快照蛋白质检测。标准系统Midi印迹系统首先代,单孔免疫检测对照,茴香霉素处理和PDGF处理的3T3小鼠成纤维细胞裂解液(10-0.63 ug)被转移到Immobilon9-P膜上。印迹被阻止含0.5%的非脂肪干mik(NFDM),并在加筋的盐水中制备含0. 1%Tweene 20表面活性剂(TBST),并用主要抗B-Tubulin探测(MAB3408)和次级HRP偶联的山羊蚂蚁(AP1 24P)在上述条件。将印迹暴露于X射线胶片一分钟。图2. erbB2的免疫检测:SNAP i.d.9 2.0系统与SNAP i.d.系统(首先代)与标准免疫检测s。 S上海益启生物的WB实验加速器询价公司电话。宝山区Merck仪器代理价
中移出并在恒定的温度下孵育颤抖。如果需要过度保温,建议冷藏。虽然表面上的污点支架可能看起来部分干燥,印迹不会变干,因为溶液包含在框架中。注意:如果长时间处理多个印迹,则可以堆叠印迹固定框架减少工作空间。可选:如果要回收一抗,请先将抗体回收盘放入底座,然后再继续执行步骤4。4.延长孵育时间后,将框架放回底座上,卸下盖子,然后按照步骤8进行操作。通用议定书第12条。注意:SNAP i.d不需要延长二抗的孵育时间。 2.0系统。建议使用5倍浓度的二抗,持续10分钟。抗体回收1.执行《通用议定书》的步骤1至5,但将真空时间增加到2分钟,以确保所有的封闭溶液都已从框架的凹槽和通道中移除。2.从底座上取下印迹固定框架,并用一根刷子擦拭框架底部的所有残留液体。纸巾。3.将抗体收集盘放入底座,确保抗体上的定徐汇区Merck微流控细胞芯片分析仪Merck仪器订购益启生物提供专业的细胞计数器。
有关详细信息,请参见表2。●不建议在SNAP i.d. @ 2.0系统中剥离印迹。印迹已被剥离可以从阻塞步骤开始在SNAP i.d.o 2.0系统中对遵循标准协议的系统进行重新探测。●如果不需要剥离(例如,如果使用其他二抗进行检测),则可以重新检测印迹快速清洗后,立即在SNAP i.d.9 2.0系统中使用。 优化准则抗体已经开发了优化指南,以使用户能够转换所用抗体的浓度将标准免疫检测测定法浓缩至适用于SNAP i.d. @ 2.0系统的浓度。大多数用户会能够使用相同量的抗体,但与标准品相比,体积更小,浓度更高免疫检测。但是,当使用扩展抗体方案(第12页)时,可以使用相同的方法通常用于标准免疫检测的一抗的浓度,体积和时间,其次是较高浓度的二抗,持续时间较短。表1.如何根据SNAP i.d.9
上,气体1.准备1-20x10cells/mL的细菌细胞悬液。这生产线实现了大气控制浓度可能需要优化,具体取决于细胞的类型和所需的陷印密度。流特性2.从池出口孔6和流出口孔7吸出溶液。1-5井的流动特性如图6所示。3.从细胞入口孔8吸出溶液,用移液管吸取50uL细胞流出井眼的流速与压力的函数关系。如果大于一个悬浮到该孔中,将50uLPB吸移到细胞出口孔6中。通道加压,将流率乘以确保用液体覆盖孔底部的孔加压通道得出总流量。4按照40cellASICONIK2微流体系统振荡器指南。5.打开CellASICONIX2Sof软件,选择“新建”之一35实验选项,然后在下拉列表中找到BO4A板。在“手动模式”选项卡(图7)上,单击“运行”单元加载顺序按钮。建议的压力和流动时间第8组的压力为138kPal益启生物公司带您了解细胞分析仪详情。
x @ -FAgo过滤器(或等效过滤器)建议在保温瓶和真空源之间使用,例如o保护真空源免受污染。●将真空瓶连接到真空源的真空管●前肢●封闭剂,例如脱脂/低脂干奶(0.5%以下),酪蛋白,牛血清白蛋白(BSA)或其他市售的封闭剂,例如blok * -CH缓冲液(请参阅表5)抗体(单克隆和/或多克隆),检测试剂●洗涤缓冲液:Tris或磷酸盐缓冲盐溶液,pH 7.4,补充了Tween @ 20表面活性剂(TBST)或PBST)●转移蛋白的印迹吸笔座尺寸比较大印迹尺寸(厘米)多印迹4.5 x8.4小型的7.5 x 8.48.5 x 13.5。 一般准则●如果蛋白质已经转移到已经干燥的PVDF膜上,请用100%重新润湿印迹甲醇,然后在组装前用蒸馏水冲洗。如果蛋白质已转移至硝酸纤维素膜干燥后,用蒸馏水重新益启生物的细胞计数器怎么样?宝山区Merck仪器代理价
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体回收率差。 印迹大会和总议定书 1.用支撑层(蓝色边缘)握住吸墨纸托并弄湿膜层(白色)在润湿过程中溢出水提供的托盘。不要弄湿支撑层。放置湿的滚动板上的污点固定器。2.如果需要,将印迹预先在甲醇和水中浸湿,然后将其放置在印迹支架中心,蛋白质面朝下。注意:印迹不得超过材料中指定的尺寸必填部分。3.轻轻滚动印迹以去除气泡,然后稀释印迹保持并滚动一次。4.打开吸墨纸固定框架,用力将吸墨纸固定在蛋白质面朝上,然后将其放入框架中。一个缺口吸墨架可确保正确放置在框架中。注意:如果只在框架中运行一个MultiBlot,请放置孔空白卡在第二口井中。5.关闭并锁定框架。加入30 mL封闭溶液(MultiBlot为15毫升)。向下按框架并转动系统旋钮施加真空。当框架完全为空时,关闭真空。注意:如果使用抗体回收托宝山区Merck仪器代理价