克奈尼亚小单孢菌菌种

铜绿假单胞杆菌与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；检测灵敏度可达10~100拷贝；该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。PCR反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法与热启动法相结合，更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应，增强PCR扩增的特异性，能得到良好的PCR结果。因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。铜绿假单胞菌在乙酰胺肉汤实验下呈阳性。克奈尼亚小单孢菌菌种

磁珠菌种使用说明：在无菌的条件下，打开瓶盖并使用灭菌的接种棒或镊子移出一个小珠，盖好瓶盖并尽快放回低温保存。过度改变温度会减少生物生存能力。小珠可直接使用接种在固体培养基培养皿上，盖上培养皿盖，等待10分钟待磁珠内部菌种解冻，倾斜培养皿以滚动磁珠，使磁珠在培养皿表面滚动，滚动到的地方则接种了菌种。或者小磁珠可加入至100-200ul液体培养基中，震荡摇晃几次，然后用无菌吸头吸取上述液体培养基至培养皿上，涂布均匀即可。

定量冻干粉菌种使用说明：冻干粉活化，沿着铝塑盖箭头方向打开塑料盖，然后轻轻撕开，去除铝盖，然后轻轻打开橡胶塞盖，准确取1ml溶解液加入至西林瓶中，盖上橡胶塞盖，上下颠倒混合均匀，用无菌吸头取0.1ml涂布到含培养基培养皿上，培养2-3天。注意真空菌种管一旦敲开里面的冻干粉就必须马上用完，如果冷藏定量可能会有误差或可能出现染菌。

定量孢子悬液使用说明：从冰箱拿出孢子悬液，室温解冻后，摇匀。用75%酒精擦拭西林瓶盖，酒精灯上灼烧消毒后，撕开西林瓶铝盖。用无菌的吸头或者无菌的滴管吸取一定量的孢子悬液，直接喷雾于样品表面。如果孢子悬液需要稀释，可以用无菌的0.9%的生理盐水直接稀释后直接喷雾于样品表面。 盐反硝化枝芽孢杆菌金黄色葡萄球菌代谢类型为需氧或兼性厌氧，对环境要求不高。

铜绿假单胞菌的液氮较低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至-35摄氏度时，即可置于-150摄氏度～-196摄氏度的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法保存。微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方，室温放置时问过长会导致菌种衰退；菌种操作应在无菌条件下进行，防止杂菌污染，斜面菌种保藏时间通常为1-2个月，应根据菌种状况及时转接；冻干菌种保藏时间通常为5~10年；菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时更换新的菌种。

对铜绿假单胞杆菌的复苏，要先准备一个茶缸或1000毫升的烧坏，内装2/3杯37摄氏度的温水。从液氮中取出冻存管、迅速置于温水中并不断搅动。使冻存管中的冻存物在1分钟之内融化。打开冻存管，将细胞悬液吸到离心管中。1000rpm离心10分钟，弃去上清液。沉淀加10毫升培养液，吹打均匀，再离心10分钟，弃上清液。加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中，37摄氏度培养，第二天观察生长情况。器材通常为液氮罐、冻存管（塑料螺口冻存管或安瓿瓶）、离心管、吸管、离心机等。试剂通常为0.25％胰酶、培养基、含保护剂的培养基（即冻存液）。冻存液配制是培养基加入甘油或DSMO，使其终浓度达5—20%。保护剂的种类和用量视不同细胞而不同。配好后4摄氏度下保存。目前人们从枯草芽孢杆菌不同菌株的代谢产物中分离纯化了多种有效的抗类菌物质。

典型的金黄色葡萄球菌为球型，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。革兰染色阳性。金葡菌具有抗干燥、耐热、耐低温、耐高渗的特性。在干燥环境中存活数月；空气中存在，但不繁殖。加热70℃1h，80℃30min不被杀死。在冷冻食品中不易死。在含有50%～66%蔗糖或15%以上食盐食品中才可被抑制，能在15%NaCl和40%胆汁中生长。金黄色葡萄球菌是院内传染及社区获得性传染的常见细菌之一。随着ß-内酰胺类维生素的普遍应用，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)随之增加，且引起的传染和病死率有逐年增加的趋势。MRSA可通过接触途径进行传播，即易感人群从携带者或传染者身上获得MRSA，导致传播流行。枯草芽孢杆菌在发酵过程中能产生多种氨基酸，对作物有生长调节的作用。萎蔫短小杆菌菌株

金黄色葡萄球引起的食物中毒占食源性微生物食物中毒事件的25%左右。克奈尼亚小单孢菌菌种

有些铜绿假单胞杆菌的保藏方法，如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。铜绿假单胞杆菌的多聚酶链式反应基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成模板DNA经加热至93摄氏度左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。克奈尼亚小单孢菌菌种

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