细胞培养过程中,细胞培养基是不可或缺的,细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质,也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。通常细胞体外培养时需要加入血清,以维持细胞的生长和存活。而除了血清之外,部分细胞在培养过程中需要添加胰岛素和β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol)等成分来维持细胞状态。MCF-7和NIH:OVCAR-3等细胞需要额外添加胰岛素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等细胞则需要添加β-巯基乙醇,不同细胞加入量会有差异,需根据细胞类型判断。液体培养基普遍应用于微生物菌株的生长、染色及细胞背景下的细胞培养等方面。淀粉水解培养基
按照培养基用途区分:鉴别培养基,一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂,从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。例如,伊红美蓝乳糖培养基(EMB)。培养基的分类有哪些?培养基按功能用途可分为几种?培养基的分类有哪些?培养基按功能用途可分为几种?常见的培养基有细菌培养基、牛心培养基、根瘤菌培养基、放线菌培养基、面粉琼脂培养基、微藻培养基、豆芽汁培养基、食用菌菌种培养基、动物细胞培养基等等。碳源实验液体培养基牛肉精蛋白胨培养基是常用的富营养培养基,适用于快速生长的微生物。
1951年厄尔开发了供动物细胞体外生长的人工合成培养基(MEM)。合成培养基的种类相当多。合成培养基成分已知,便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比,有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代,因此,细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分,以克服合成培养基的不足。普遍的作法是加入小牛血清。动物血清成分复杂,各种生物大小分子混合在一起,有些成分至今尚未搞清楚。血清对细胞生长很有效,但后期对培养产物的分离、提纯以及检测造会成一定困难。另外高质量的动物血清来源有限,成本高,限制了它的大量使用。无血清培养基不加动物血清,在基础培养基中加入细胞生长有效因子等。
培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有水、氮源、无机盐(包括微量元素)、碳源、生长因子(维生素、氨基酸、碱基、色素和血清等)等。培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在3-6℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管,均改制成粉末。培养基种类繁多,根据需求选择适合的培养基对于成功的微生物培养至关重要。
培养细胞时应使用5%还是10%CO2,或者根本没有影响?一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中 NaHCO3含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCO3 为每公升1.5g时,则应使用5%CO2培养细胞。NaHCO3的作用:培养基中使用了 NaHCO3-CO2 缓冲系统,并采用开放培养,使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶,再通过稳定调节温箱中CO2浓度(5%) ,与培养基中的NaHCO3处于平衡状态,从而调节培养基的PH值。NEAA:非必须氨基酸,NEAA(非必需氨基酸) 是含几种非必需氨基酸的合剂,添加到的原培养基不同,NEAA 也有不同的种类,比如添加至MEM的NEAA,含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。培养基是一种营养物质混合物,可以为细胞提供生长所需的物质。西蒙氏柠檬酸盐琼培养基
含血清培养基是一种以动物血清为主的培养基普遍用于诱导细胞分化和胚胎发育研究等方面。淀粉水解培养基
L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?L-谷氨酰胺(L-Glutamine)是细胞生长的必须氨基酸,可作为培养细胞的能量来源,参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中状态不稳定,它的降解速率随保存时间,保存温度及保存环境pH值等变化而变化。L-丙胺酰-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine)是细胞培养中普遍使用的L-谷氨酰胺的替代品,其在水溶液中稳定性高,即可保持长时间稳定的营养供给,也降低了分解产物造成的细胞毒性。L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液(L-alanyl-L-glutamineslution)可作为哺乳动物贴壁细胞或悬浮细胞培养添加剂。与谷氨酰胺相比,L-丙胺酰-谷氨酰胺不会自行降解成氨而导致细胞毒性,作为添加物培养条件更加可控,可有效提高细胞活力。淀粉水解培养基
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