动物细胞培养必需的溶液,平衡盐水(BSS):Hanks 液和Earle液是常用的BSS基础溶液。PH调整液:3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液(二羟乙基哌嗪乙烷磺酸)细胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、胶原酶溶液。1)青、链霉素,每毫升培养液含100U青霉素和100ug链霉素。2)卡那霉素:终浓度为50ug/ml培养液。3)制霉菌素:浓度25U/ml,小瓶分装,每瓶一次用完。常用的动物血清主要有牛血清和马血清。牛血清分为胎牛血清和犊牛血清,前者来源少,价格高;后者要求刚产下尚未哺乳的小牛,因为哺乳后的小牛血清中可能含有更复杂的成分。血清中已知的成分主要有蛋白质、氨基酸、葡萄糖等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋白。常见的细菌类培养基包括营养琼脂培养基、大肠杆菌培养基、金黄色葡萄球菌培养基等等。MH肉汤
bFGF是一个肝素结合的多肤类丝裂源,普遍分布于各种组织中。bFGF 是一种重要的细胞增殖分化调节剂,可刺激多种细胞的增殖。有研究发现它对滋养细胞也有促增殖作用。bFGF 主要是与细胞膜上FGF受体结合发挥作用,刺激与增殖有关的基因表达。Thomson 等认为,像其他体外培养的人体细胞一样,hES 细胞要求 bFGF 的存在以促进增殖。同理EGF(上皮生长因子) , 是人体内的一种活性物质,由53个氨基组成的活细胞,藉由刺激表皮细胞生长因子受体之酪氨酸磷酸化,达到修补增生肌肤表层细胞,据说对受伤、受损之表皮肌肤拥有很好的疗效,其较大特点是能够促进细胞的增殖分化。所以加入它们都是促进细胞增殖的。VP半固体琼脂(VP)常用的培养基中添加的基本营养物质包括碳源、氮源、磷酸盐、有机物、无机盐和微量元素。
细菌培养基之面粉琼脂培养基:面粉60g,琼脂20g,水1000ml把面粉用水调成糊状,加水到500ml,放在文火上煮30分钟。另取500ml水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用。微藻培养基,BG-11培养基:NaNO3 1.5g,K2HPO4 ·3H2O0.04g,MgSO4·7H2O0.075g,CaCl2 ·2H2O0.036g Citric Acid (柠檬酸)0.006g,Ferric ammonium citrate(柠檬酸铁铵0.006g,EDTA (dinatrium-salt) 0.001g,Na2CO3 0.02g,A5 + Co solution * (A5溶液1000×)1ml Distilled Water (蒸馏水)919ml。
营养培养基(nutrient media) 在基础培养基中添加一些特殊的营养物质,如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生长因子等,可供营养要求较高的细菌在其中生长。例如链球菌、肺炎链球菌等需在含血液或血清的培养基中生长;结核分枝杆菌的培养基中须添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。比较常用的营养培养基是血琼脂平板。增菌培养基(enrichment media) 一般为液体培养基,用于细菌的增菌培养,可泛用,也可专门用的,在专门用的增菌培养基中常含有目的菌生长所需要的特殊营养物质或生长因子。为了避免细胞爆破释放DNA和蛋白质,培养基中常常添加DNA酶和蛋白酶等酶类。
培养基中谷氨酰胺作用及使用方法?几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求,细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。所以,各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置-20℃ 冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基 4℃冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽,是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的 alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I 二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有较小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。致病菌常用的培养基包括营养琼脂平板培养基、马铃薯葡萄糖琼培养基。纤维素酶检测培养基
培养基中的各种成分会被微生物不同速率地利用,因此需要在适当的时间点更新培养基以维持细胞的生长状态。MH肉汤
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