Troubleshooting 问题 微珠计数不足 本底过高 微珠不在制定的区域内或圈门中 整个微孔板的信号与本底相同 阳性对照的信号任样品信号过高或饱和 样品信号过低 样品和/或标准品CV值较大 微孔板洗板机吸液高度设置过低微珠混合物配制不当 样品颗粒物或粘度引起干扰 没有正确调整探针高度 本底孔受污染 洗涤不充分 Luminex只器没有正确校准或近期没有校准 没有正确词整门设置 微珠区域设置错误所用样品类型不正确只器没有洗涤或primed 做珠暴露于光下检测不正确或检测不到未加入抗体Sigma抗体上海授权代理商。黄浦区Calbiochem抗体抗体订购
对于成功的ChIP实验,选择适当的ChIP抗体是**关键的步骤之一。即使是比较高质量的抗体,即在经典的Western blot验证中表现非常好的抗体,也不一定适合ChIP。比较好只考虑使用在ChIP实验中专门验证过的抗体。一般的, ChIP实验之后会用定量PCR(qPCR)来验证某一特定DNA序列是否与靶蛋白有关。研究人员可以采用这种经典方法评估目标蛋白与已知的靶基因之间的相互作用。 ChIP实验可以细分为以下几个主要步骤: 样品制备 蛋白与DNA交联 细胞裂解和染色质片段化 染色质免疫沉淀闵行区Sigma抗体抗体订购神经抗体的报价具体是多少呢?
如果实验试剂将用于进一步测量,应避免直接使用移液管从试剂瓶中移取。(氧化活性污采物可通过非特异性显色影响费底物),检查所用抗体和陶结合物的实验验稀释度 检查确保样品根据建议的样品操作抽提、配制和贮菱(聚丙烯试管,澄清样品的贮载温度为-20℃)。配置样品和标准 品时究分程匀检查您的移液器,必要时进行校准。在每次移液器移取后更换移液器吸头。加样后,充分震荡微孔板,使试剂混匀 检查自动微孔板洗板机能正常工作;在每个洗涤步骤后,必须完全除去残留液体。
如果目标蛋白的种属不包括在已检测的种属中,您可以通过蛋白数据库快速检查特异性蛋白序列。 抗体种属来源 一抗的种属来源在选择二抗时有很大的作用。二抗应尽量与您的样本物种相隔较远。 在说明书或供应商网站上查询已验证的数据: 1、查看说明书或供应商网站上的验证数据并检查数据质量,及验证实验方法。 2、查看检测的样本为何种类型(细胞裂解液、组织匀浆=等)。 3、只使用纯化重组蛋白得到的结果可能无法作为细胞或组织样本的比较好参考!组蛋白抗体的报价具体是多少呢?
通过改变参数(见第5.3节)和评估他们对梁色质回收率的影响来优化这些步骤。使用机械力,如杜恩斯匀浆器或坡璃珠改善细脆溶辉。优化裂解步要和避免起泡。 在甲醛中培养时间过长可能掩盖经ChIP抗体识别所需要的表位。如果您使用的是单克隆抗体,此问题可能更加严重。过度交联也可能导致超声处理时复合物难以形成。优化交联步骤∶甲醛的**终液度应为1%;您应确定***的交联时间,然后再继绩进行实验。在研究方案的后续步骤中,交联不足可能引起靶蛋白从DNA解离。Sigma抗体的报价具体是多少呢?闵行区Sigma抗体抗体订购
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模塞只器生产厂家说明书,校准Luminex仪器,至少每周一次或在温度变化3℃时校准。 一些Luminex仪器要求与试剂盒方案中所述不同的门)设置。使用仪器默认设置。 检查试剂盒说明书中正确的微珠区域或分析物选择。 含有机溶剂的样品,或如果样品为高粘性,应根据需要进行稀释或透析。PMimeLuminex只器4次,以除去气泡;如果有任何残留酒精或消毒液,用酒精或消毒液或水洗涤4次 在所有解育步理中,保持微孔板和微珠混合物用果盖或铝培覆盖。加入适当的检测执体并继线t。黄浦区Calbiochem抗体抗体订购