抑肽酶(Aprotinin),一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,广泛应用于生物技术领域。本研究探讨了利用大肠杆菌(E. coli)表达系统生产重组抑肽酶的方法,及其在科研和工业生产中的优势。引言抑肽酶,又称胰蛋白酶抑制剂,是一种小分子蛋白,能有效抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶的活性。在生物制药、细胞培养和分子生物学研究中,抑肽酶的使用对于防止非特异性蛋白水解至关重要。传统的抑肽酶主要来源于动物,如牛肺,但存在外源病毒污染的风险。因此,利用大肠杆菌表达系统进行重组抑肽酶的生产,可以提供一种无动物源、高纯度、质量稳定的替代品。材料与方法基因克隆与表达载体构建:人源Ⅲ型胶原蛋白基因被克隆并构建到适合大肠杆菌表达的质粒载体中。大肠杆菌表达菌株的构建:通过转化,将构建好的质粒导入大肠杆菌宿主菌中,构建表达菌株。发酵培养:利用发酵罐进行大肠杆菌的扩大培养,以提升重组抑肽酶的产量。蛋白纯化:通过多次柱纯化获得高纯度的重组抑肽酶。透明质酸的生产可以通过动物组织提取、微生物发酵或化学合成等方法进行。Recombinant Cynomolgus AXL Protein,His Tag
抑肽酶(Aprotinin),又称为抑蛋白酶肽,是一种竞争性、可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可与丝氨酸蛋白酶形成稳定复合物并阻断酶的活性位点,这种结合是可逆的,大多数的抑肽酶-蛋白酶复合物在极端的pH<3.0的条件下解除结合。抑肽酶抑制糜蛋白酶、胰蛋白酶、激肽释放酶和血纤维蛋白溶酶,不能抑制Xa因子和凝血酶。从结构上来说,抑肽酶是一种来自牛肺的单体球状蛋白,由58个氨基酸组成并排列在具有三个交联二硫键的单个多肽链中。重组抑肽酶采用大肠杆菌表达,在GMP法规下生产,不含任何动物源成分,无动物源性的病毒污染,氨基酸序列与来源于牛肺的抑肽酶完全一致,具有与动物源性抑肽酶相同的酶学性质,可替代动物源性抑肽酶用于各种生物技术过程中,如:重组蛋白生产中抑制丝氨酸蛋白酶的活性;细胞培养等。Recombinant Human ADAM9 Protein,His Tag在蛋白质工程领域,泛素蛋白可以作为一种标签或融合蛋白,用于提高目标蛋白的可溶性、稳定性或功能性。
糖苷酶F(PNGaseF)酶活定义(UnitDefinition)1个酶活力单位指在10μL的反应体系中,37℃条件下1小时从10μg变性RNaseB中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。储存条件-25~-15℃保存,有效期1年。使用方法1、变性条件下蛋白质去糖基化:1)在水中加入1μLBuffer1和目标糖蛋白(1-20μg),至终体积10μL;2)100℃温度下煮沸10min使其变性,冰上冷却,离心10秒;加入2μL的Buffer2、2μL的10%NP-40、6μL去离子水,总反应体积20μL;加入1-2μL的PNGase,轻轻混匀。在37℃孵育1-3h。2、非变性条件下蛋白质去糖基化:1)在水中加入2μL的Buffer2和目标糖蛋白(1-20μg)至体积为20μL。2)加入2~5μL的PNGaseF,轻轻混匀。3)37°C孵育4-24h。注意:在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化,在非变性条件下可能需要增加PNGaseF的量和延长孵育时间。注意事项1.PNGaseF建议搭配我司提供的配套缓冲液使用,按我司说明书建议的操作量配套缓冲液足够。如您由于使用体系造成配套缓冲液不足,可咨询当地销售进行购买
提供来源于牛肺的抑肽酶(动物源性)。产品信息规格1mg/10mg产品性质来源(Source)大肠杆菌表达CAS号(CASNO.)9087-70-1外观(Appearance)白色、类白色、类黄色粉末溶解度(5mg/mlin0.9%NaCl)可溶,澄清或微浊纯度(Purity)≥95%(HPLC)蛋白含量(Proteincontent)≥60%酶浓度(EnzymeConcentration)≥3.0EPU/mgpro活性定义(ActivityDefinition)胰蛋白酶单位:每秒钟能水解1μmoL的N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)为1个胰蛋白酶单位。酶活单位:能抑制1个胰蛋白酶单位的活力称为1个抑肽酶活力单位(EPU)。储存条件冻干粉2~8℃保存,有效期2年。使用方法抑肽酶与蛋白酶是等摩尔有效结合,推荐的结合pH>6.0,在pH<3.0的条件下不结合。可直接使用0.9%NaCl溶解,溶解后可-20℃储存。人α-凝血酶,一种丝氨酸蛋白酶,是凝血级联反应中的中心酶,对止血和其他多种生理过程至关重要。
SARS-CoV-2,whichcausestheglobalpandemiccoronavirusdisease2019(Covid-19),belongstoafamilyofvirusesknownascoronavirusesthatalsoincludeMERS‑CoVandSARS-CoV-1.Coronavirusesarecommonlycomprisedoffourstructuralproteins:Spikeprotein(S),Envelopeprotein(E),Membraneprotein(M)andNucleocapsidprotein(N).TheSARS-CoV-2Sproteinisaglycoproteinthatmediatesmembranefusionandviralentry.TheSproteinishomotrimeric,witheach~180-kDamonomerconsistingoftwosubunits,S1andS2.TheRBDofSARS-CoV-2bindsametallopeptidase,angiotensin-convertingenzyme2(ACE-2).BeforebindingtotheACE-2receptor,structuralanalysisoftheS1trimershowsthatonlyoneofthethreeRBDdomainsisinthe"up"conformation.Thisisanunstableandtransientstatethatpassesbetweentrimericsubunitsbutisneverthelessanexposedstatetobetargetedforneutralizingantibodytherapy.PolyclonalantibodiestotheRBDoftheSARS-CoV-2proteinhavebeenshowntoinhibitinteractionwiththeACE-2receptor,confirmingRBDasanattractivetargetforvaccinationsorantiviraltherapy.全长A2aR蛋白具有天然完整构象,VLP(病毒样颗粒)固有特征可以带来更高的免疫原性。Recombinant Cynomolgus Neuropilin-1 Protein,His Tag
C5a通过与髓源性抑制细胞 (MDSCs) 膜上的受体C5aR1结合,招募MDSCs至炎症局部,抑制CD8+ T细胞增殖与功能。Recombinant Cynomolgus AXL Protein,His Tag
糖苷酶F(PNGaseF)是一种酰胺水解酶,经过和平空间站伊丽莎菌克隆,主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌。N-糖苷酶F(PNGaseF)在酵母中重组表达(比活性:100000U/mL),可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGaseF的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨残基之间的酰胺键,同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。本产品带his标签,常应用于抗体及其相关蛋白完全去糖基化。另外,我司还提供其他类型的糖苷酶,包括酵母重组表达的N-糖苷酶F(比活性:750000U/mL),内切糖苷酶H,内切糖苷酶S。产品信息产品性质中文别名(Chinesesynonym)N-糖酰胺酶F;N-糖苷酶F英文别名(Englishsynonym)PNGaseF来源(Source)酵母重组表达分子量(Molecularweight)36kDa比活性(Specificactivity)100000U/mL缓冲液组分(Buffer)20mMTris-HClpH7.5,50mMNaCl,5mMEDTA,50%GlycerolRecombinant Cynomolgus AXL Protein,His Tag
使用BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads(血液基因组DNA提取试剂盒,磁珠法)进行血液样本中基因组DNA的提取,主要步骤如下:1.**实验准备**:准备抗凝全血样本(如EDTA抗凝血),移液器及无菌,15ml离心管,无水乙醇,70%乙醇,干净的吸水纸,涡旋振荡器,金属浴/水浴,台式离心机等。2.**样本处理**:取适量血液样本,根据试剂盒要求,可能需要将血液体积调整至特定量,例如200μl,并可能需要加入PBS缓冲液。3.**裂解血液细胞**:向血液样本中加入蛋白酶K和细胞裂解液,涡旋混匀后,置于金属浴或水浴中进行裂解,通常在65°C孵育10...