Endo H糖苷内切酶H:结构、功能及其在糖生物学中的应用摘要Endo H糖苷内切酶H(Endo H)是一种专门作用于糖链的内切酶,对研究蛋白质糖基化修饰具有重要意义。本文将探讨Endo H的结构特性、催化机制以及在糖生物学研究中的应用。引言蛋白质糖基化是一种普遍存在的翻译后修饰,对蛋白质的结构、稳定性和功能发挥着关键作用。Endo H是一种能够特异性识别并切割高甘露糖型N-连接糖链的内切酶,广泛应用于蛋白质糖基化分析。Endo H的结构特性Endo H由菌Helix pomatia分泌,其分子量约为130 kDa。该酶具有一个催化中心,能够识别并切割特定的糖苷键。Endo H的三维结构尚未完全解析,但其氨基酸序列和某些关键催化残基已被确定。催化机制Endo H通过水解N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)与N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)之间的β-1,4糖苷键,从而释放高甘露糖型N-连接糖链。该过程不涉及辅因子,表明Endo H催化机制可能依赖于其活性位点的氨基酸残基。CB1受体包含多个跨膜α-螺旋结构域,这些结构域使得受体能够嵌入细胞膜中。 它具有七个跨膜区域。Recombinant Human HSP70 Protein,His Tag
糖苷酶F(PNGaseF)酶活定义(UnitDefinition)1个酶活力单位指在10μL的反应体系中,37℃条件下1小时从10μg变性RNaseB中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。储存条件-25~-15℃保存,有效期1年。使用方法1、变性条件下蛋白质去糖基化:1)在水中加入1μLBuffer1和目标糖蛋白(1-20μg),至终体积10μL;2)100℃温度下煮沸10min使其变性,冰上冷却,离心10秒;加入2μL的Buffer2、2μL的10%NP-40、6μL去离子水,总反应体积20μL;加入1-2μL的PNGase,轻轻混匀。在37℃孵育1-3h。2、非变性条件下蛋白质去糖基化:1)在水中加入2μL的Buffer2和目标糖蛋白(1-20μg)至体积为20μL。2)加入2~5μL的PNGaseF,轻轻混匀。3)37°C孵育4-24h。注意:在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化,在非变性条件下可能需要增加PNGaseF的量和延长孵育时间。注意事项1.PNGaseF建议搭配我司提供的配套缓冲液使用,按我司说明书建议的操作量配套缓冲液足够。如您由于使用体系造成配套缓冲液不足,可咨询当地销售进行购买Recombinant Cynomolgus Coagulation factor XI Protein,His Tag在蛋白质的晶体学研究中,去除糖链可以帮助获得去糖基化的蛋白质,这有助于更清晰地解析蛋白质的三维结构。
Enterokinase,Recombinant,ExpressedinE.coli大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)注意事项1.本产品所讲述的缓冲体系需要自行配置。2.不建议37℃条件下酶切,可能会有非特异性酶切出现。3.在>200mM咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油,酶切会受到影响。如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种,为获得理想的酶切结果,请先将样品透析到25mMTris-HCl8.0缓冲液中,然后再进行酶切实验;若不方便透析,可将样品稀释到咪唑含量在100mM以下,NaCl浓度在50mM以下,甘油浓度小于5%以下进行酶切,酶的用量与蛋白比例不变;若干扰因素很多,且不便去除,需要适当增加酶量或延长酶切时间,有助于得到理想的酶切效果。4.磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用,痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性,因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。5.本品是具有高酶活力重组肠激酶,切割蛋白使用量少,可不考虑除去。后续如需去除重组肠激酶,可用阴离子交换树脂(如DEAE-FF)对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下:平衡缓冲液:25mMTris-HClpH8.0洗脱缓冲液:25mMTris-HClpH8.0,含100mMNaCl6.蛋白酶切效果不好,可适当增加酶量,或适当延长酶切时间。
Dabigatranetexilatemesylate,又称甲磺酸达比加群酯,是可口服的凝血酶抑制剂,是一种抗凝药,通过竞争结合凝血酶的纤维蛋白特异结合位点,阻碍纤维蛋白生成,从而抑制血栓的形成。产品信息英文别名(EnglishSynonym)Dabigatranetexilatemesylate,Pradaxa,BIBR1048MS,Dabigatranetexilatemethanesulfonate中文名称(ChineseName)甲磺酸达比加群酯,达比加群酯甲磺酸盐靶点(Target)Thrombin通路(Pathway)Protease/MetabolicEnzyme--ThrombinCAS号(CASNO.)872728-81-9分子式(Formula)C35H45N7O8S分子量(MolecularWeight)723.84外观(Appearance)粉末纯度(Purity)≥98%溶解性(Solubility)溶于DMSO运输和保存方法-25~-15℃保存,有效期3年。使用方法【数据来自于公开发表的文献,供参考,具体使用浓度请参考相关文献,并根据自身实验条件(如实验目的,细胞种类,培养特性等)进行摸索和优化。】动物实验(体内实验)在体内,口服dabigatranetexilate在大10-50mg/kg)和恒河猴(1-5mg/kg)时间剂量依赖性地表现出抗凝效果。泛素化可以是单泛素化,也可以是多泛素化或多聚泛素化,这取决于靶蛋白上连接的泛素分子的数量和方式。
利用PCR技术扩增得到编码土豆羧肽酶抑制剂(carboxypeptidaseinhibitorfrompotato,CPI)活性多肽基因,克隆于表达载体pGEX一4T一1的多克隆位点中,得到重组质粒pGCPI,测序后将重组质粒转化到受体茵EscherichiacoliBL21中。重组茵经IPTG诱导表达,超声波破茵后,通过谷胱甘肽sepheroseFF亲和层析柱一步纯化得到融合蛋白,纯度大于97%。融合蛋白经凝血酶切割并分离除去谷胱甘肽一S一转移酶后得到纯度大于98%的重组CPI,ELISA鉴定产物具有免疫原性,体外检测表明其促进纤溶的生物功能与天然CPI无明显差异。研究泛素-蛋白酶体途径:重组人泛素可用于研究泛素化修饰和蛋白降解过程。Recombinant Human Vimentin
泛素化是一种蛋白质翻译后修饰过程,涉及将泛素分子共价结合到靶蛋白上。这个过程由一系列酶促反应组成。Recombinant Human HSP70 Protein,His Tag
透明质酸酶,英文名称Hyaluronidase,一类能够降低体内透明质酸活性的酶的总称,结构上由4个相同亚基构成,每个亚基分子量接近14kDa,该酶是一种糖蛋白,包含5%的甘露糖和2.2%的葡萄糖胺。功能上该酶可随机裂解透明质酸、软骨素和硫酸软骨素中的β-N-乙酰己糖胺-[1→4]糖苷键。常与胶原酶联合使用于降解细胞外基质,从而从组织中分离活细胞。本品来源于牛睾丸,活力值为400–1,000units/mg,合适的pH值为4.5–6.0。产品性质中文别名(ChineseSynonym)玻璃糖醛酸酶;玻璃酸酶英文别名(EnglishSynonym)Hyaluronoglucosaminidase;Hyaluronate4-glycanohydrolaseCAS号(CASNO.)37326-33-3来源(Source)牛睾丸分子量(MolecularWeight)~55kDa类型(Type)I-S外观(Appearance)淡黄色至米黄色至褐色粉末Recombinant Human HSP70 Protein,His Tag
磁珠法质粒小量抽提试剂盒是一种利用磁性纳米颗粒固相核酸富集技术来纯化质粒DNA的产品。它通常包括高性能纳米磁珠和独特的缓冲体系组合,通过裂解菌体后释放的DNA,能够有效地结合于磁珠表面,漂洗除杂后获得高质量的目的质粒。以下是磁珠法质粒小量抽提试剂盒的一些主要特点和应用:1.**快速简便**:操作步骤简单,无需多次离心,整个抽提过程通常只需20-25分钟。2.**高得率和纯度**:可以从1-5ml新鲜大肠杆菌菌液中分离纯化2-20µg高质量的质粒DNA。纯化得到的DNA质量高,完整性好,OD260/280比值一般为1.8~1.9之间,OD260/230比值大于2.0。3.**适用性广**:适用于...