2.0系统计算SNAP i.d.9 2.0系统所需的抗体浓度用于标准免疫检测的浓度标准SNAP i.d.o 2.0免疫检测免疫检测多印迹迷你印迹Midi污点_Ab浓度1毫克/毫升1毫克/毫升1毫克/毫升1毫克/毫升所需抗体量_ 1微克0.25微克0.5微克1微克使用的抗体量30毫升2.5毫升5毫升10毫升比较终抗体稀释1：30,0001：10,0001：10,0001：10,000使用的抗体库存1微升0.25微升0.5微升1微升由于每种抗体都是只有一个的，并且检测试剂的灵敏度各不相同，因此可能有必要进行调整抗体或抗原浓度，使用的检测试剂的类型或灵敏度或印迹X射线曝光时间。请注意，本指南只作为开发比较终抗体的起点浓度以获得所需的性能。表2.封闭，抗体和洗涤的建议体积SNAP i.d.o 2.0SNA益启生物提供专业的细胞计数器。浦东新区MerckWB实验加速器Merck仪器联系人
润湿印迹。，对于大多数应用和大多数抗体而言，0.5％的脱脂/低脂干奶溶液可以提供足够的膜的阻塞。注意：请勿使用浓度高于0. 5％的干奶，因为它可能会导致吸墨纸架堵塞膜。如果使用其他封闭溶液，请参阅表5了解兼容性和推荐浓度。●在洗涤，封闭和抗体缓冲液中始终使用0.1％Tween8 20表面活性剂。这将减少溶液的表面张力，并确保孵育过程中抗体在印迹支架中的均匀分布。●由于SNAP i.d. @ 2.0系统中的免疫检测时间很短，因此建议在开始操作之前应准备一抗和二抗稀释液。●MultiBlot固定器所需的稀释抗体的总体积为2.5 mL，Mini blot固定器为5 mL，10 mL用于Midi印迹固定器。，每次需要洗30次（MultiBlot为15毫升），以确保每次洗完后都能完全清洗印迹孵化步骤。Merck细胞计数器Merck仪器咨询报价上海益启生物的细胞分析仪询价公司电话。
盘，请在步骤5之后插入托盘。有关详细信息，请参阅“抗体恢复”部分。 6.在整个表面上涂适量的一抗吸墨纸架的数量（对于MultiBlot为2.5毫升，对于迷你吸墨纸为5毫升，或10 mL用于Midi印迹）。7.在室温下孵育10分钟。解决方案将是吸收到污点固定器中，表面可能会变干。重要提示：请勿在吸尘器清洁后再使用真空吸尘器。孵育10分钟。8.向下压框架并施加真空。等待5-8秒，直到框架完全是空的。9.在连续运行真空的情况下，添加30 mL洗涤缓冲液（MultiBlot为15毫升）。重复洗涤步骤3次以上（总共4次洗涤）。当框架完全为空时，将TURN真空关闭。10.在印迹架的表面上涂适量的二抗（对于多印迹，为2.5 mL，5毫升用于迷你印迹，或10毫升用于Midi印迹）。在室温下孵育10分钟，然后
白的免疫检测：SNAP i.d.“ 2.0系统与SNAP 1.d.系统（首先代）与标准免疫检测一种。 SNAPi.d。 2.0蛋白质检测b。快照蛋白质检测。标准系统Midi印迹系统首先代，单孔免疫检测对照，茴香霉素处理和PDGF处理的3T3小鼠成纤维细胞裂解液（10-0.63 ug）被转移到Immobilon9-P膜上。印迹被阻止含0.5％的非脂肪干mik（NFDM），并在加筋的盐水中制备含0. 1％Tweene 20表面活性剂（TBST），并用主要抗B-Tubulin探测（MAB3408）和次级HRP偶联的山羊蚂蚁（AP1 24P）在上述条件。将印迹暴露于X射线胶片一分钟。图2. erbB2的免疫检测：SNAP i.d.9 2.0系统与SNAP i.d.系统（首先代）与标准免疫检测s。 S上海益启生物的联系电话。
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