将装有样品的Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管接在Amicon®Pro上样池的下端。 3. Amicon®Pro上样池内加入预先准备好的1.5 mL含有染料的反应混合液。 4. 4,000×g离心15 min。 5. 优化选做：将样品在室温下多孵育30 min。 6. 上样池中加入1.5 mL PBS± NaN3。 7. 4,000×g离心15 min换液同时浓缩。 8. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管1,000×g离心回收标记好的抗体。 特点与优点： 特别的反转离心回收设计，滞留体积很小，样品损失少， 样品回收率通常>90% 浓缩倍数达到50-200倍 Ultracel®再生纤维素膜和聚丙烯外壳将吸附降至比较低 特别设计的死体积防止离干，保证样品回收率和活性 超滤浓缩管的好处有很多。常州默克2ml超滤浓缩管订购
加入漂洗缓冲液（体积是树脂柱床体积的7.5倍）并离心。< 500μL树脂时1,000×g离心1 min；≥ 500μL树脂时2,000×g离心4 min。 4. 使用一个新的50 mL离心管作为收集管。 5. 加入洗脱缓冲液（体积是树脂柱床体积的5倍）与树脂混匀并离心。< 500μL树脂时1,000×g离心1 min；≥ 500μL树脂时2,000×g离心4 min。回收管中即纯化好的蛋白。 6. 如果是纯化抗体，在纯化产物中加入中和缓冲液。 * 进行较大体积操作时，可以延长结合反应时间，并用胶带密封上样池上沿以便颠倒混匀操作。离心前去除胶带即可。选购不带Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管的Amicon® Pro时请使用目录号ACS500024。青浦区默克离心浓缩管商家超滤浓缩管的系列有很多种。
核苷酸截留分子量（NCO） 超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的，适合各种蛋白研究，但在核酸 和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏 过，相对于球形蛋白需要更致密的膜（截留分子量更小）。所以选择 滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。 浓差极化 浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞，产生除了膜本身截留分 子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时，会形成相当于第二层滤膜作 用的胶体层，干扰分子通过滤膜，同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分 也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。
如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用上一分子量级别的超滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。 2）如果目的样本也不在滤过液中，那么： a）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？ b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？ c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是的，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。上海超滤浓缩管供应商。
无血清样品选择 3kDa 孔径是为了尽可能提高外泌体的回收率。 有血清样品选择100kDa/500kDa孔径是为了尽可能去除细胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌体的白蛋白造成的影响。 研究者可根据样品的粘稠程度，以及需要制备的目标外泌体 / 囊泡 / 颗粒的大小分布来选择和优化超滤孔径(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa)，以便达到更好的得率和操作体验。 样品体积大于 30mL 时可以考虑用超滤杯或 Centricon-70 超滤管，请注意搅拌式超滤杯在200mL 以内时吸附损耗可能较离心式超滤管略偏高。如需进一步提高特定外泌体的纯度，可选用包被相应抗体的磁珠进行亲和纯化精制。对于不同的需求我们选择不同的超滤浓缩管系列。默克0.5ml超滤浓缩管联系方式
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用超滤对分子进行分级 通过选定截留分子量的超滤操作能精确地将混在大分子中的小分子去 除的想法常常不切实际。事实上，膜的规格描述是基于截留而非通过 的性质。一项实验中，采用 100k NMWL 滤膜，大于 100kDa 的分子截 留率 >90%，但这时比膜孔径小的分子并不是完全自由地通过滤膜， 75kDa 的分子截留率为 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的 溶液中的各 种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实 践中，如果要分离两种大分子，它们之间的分子量差异应该达到 10 倍 以上，或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间，则可达到比较理想的 分离。如果蛋白溶液较为稀释，低压下操作也有助于达到更好的效果。常州默克2ml超滤浓缩管订购
