外泌体的精制磁珠法富集精制外泌体:300μg样品(相当于300μg总蛋白)用含有5μg anti-CD63抗体的溶液稀释,与protein A/G磁珠共孵育1hr,漂洗后用0.2M glycine洗脱。如果要先将抗体偶联在磁珠上(以避免抗体洗脱下来对外泌体的干扰),请参考默克磁珠操作说明书。(Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3))。推荐使用试剂目录号信息:cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。 默克已经建立了基于“微滤+超滤”的外泌体制备操作标准,相较于需要昂贵的设备及繁琐操作的超速密度梯度离心,用实验室常见的工具解决外泌体制备的高大上问题,真是惠而不费,不亦乐乎?超滤浓缩管的优点有很多。嘉定区默克0.5ml超滤浓缩管报价
对于慢***推荐Amicon® Ultra 100kDa; 对于腺***推荐Amicon® Ultra 50kDa。具体的操作步骤可以参考***浓缩纯化试剂盒FTLV00003和FTAV00003的产品使用说明书。另提供AAV(腺相关***)的制备方法供参考。 去污剂因其独特的性质,当浓度大于临界微团浓度(Critical Micelle Concentration, CMC)时,去污剂分子会聚集形成微团而改变分子构象,这有可能会影响去污剂的去除效果。 Amicon® Ultra超滤膜含有微量甘油。如果此成分干扰分析,可用缓冲液或Milli-Q®水预清洗。如果干扰仍然存在,用0.1 N NaOH清洗,然后用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。崇明区默克离心浓缩管订购益启生物公司的超滤浓缩管种类繁多。
近年来随着分离纯化技术的提高,关于外泌小体的研究成果颇丰;这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索,已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求,以及起始样品的规模、数量,可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒,对操作人员也没有特别的经验要求,超滤法后来居上,成为实验室中制备外泌体的通用方法。
蛋白复性,温和透析 D-Tube™ 透析管 如果样品很敏感而难以处理,采用温和的透析方法可以避免其在过度浓缩时发生沉淀和离心操作剪切力对样品的损害。。D-Tube™是双膜设计的透析管,**提高了样品透析表面积,在2-5小时内即可完成透析,是非常温和而高效的缓冲液置换工具。D-Tube™ 透析管的独特优点: 样品回收率> 89% • 膜和管壁皆为低吸附性材质,增加样品回收率可靠而易用 • 不会像使用夹子或打结那样造成样品渗漏和污染,安全可靠 旋盖式设计,易于打开和关紧 硬管设计,易于更充分地吸取、移走样品,即使是μL级样品加样方便,功能多样 • 采用标准***头加样,而非注射器和针头加样,减少膜破损的风险提供的浮漂适合在常见的广口烧杯中使用,方便在透析过程中换液D-Tube™ 透析管还可以用于从琼脂糖或丙烯酰凝胶电洗脱样品超滤浓缩管和其他的空压机有什么区别呢?
用超滤对分子进行分级 通过选定截留分子量的超滤操作能精确地将混在大分子中的小分子去 除的想法常常不切实际。事实上,膜的规格描述是基于截留而非通过 的性质。一项实验中,采用 100k NMWL 滤膜,大于 100kDa 的分子截 留率 >90%,但这时比膜孔径小的分子并不是完全自由地通过滤膜, 75kDa 的分子截留率为 83%,30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的 溶液中的各 种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实 践中,如果要分离两种大分子,它们之间的分子量差异应该达到 10 倍 以上,或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间,则可达到比较理想的 分离。如果蛋白溶液较为稀释,低压下操作也有助于达到更好的效果。超滤浓缩管服务电话是多少呢。杨浦区默克离心浓缩管哪家优惠
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通量(超滤效率)及其影响因素 超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得比较好的效果。滤膜的 通量的定义是流量除以面积,使用高 NMWL 滤膜可以增加通量,但同时 会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参 与影响通量的因素很多,包括: 压力:较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时,流量随着跨膜压力 (TMP)的增大而增加。正压条件下操作,如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯, 这种因素影响较为明显。如果极化影响***,通量会达到一个平台,甚 至可能随着压力的增加而降低。嘉定区默克0.5ml超滤浓缩管报价