问题 可能的原因 处理方法 印迹上出现条纹 在凝胶的蛋白负荷过量。 准确测量蛋白浓度,载入较少的蛋白。 印迹有污染或模糊 凝胶平衡不当,或在实验过程中收缩 检查凝胶平衡时间。 采用丽春红S染色时, 转膜无效 转膜时,小心除去气泡。 印迹染色较差 确保在电转过程中因为温度过高而产生气泡或凝胶/膜变形 采用丽春红S染色时, 在转膜过程中蛋白没有转移 检查设备(转膜盒、盒盖、电源)。 印迹没有染色 检查在转膜过程中凝胶和膜的顺序是 确保膜位于凝胶的右侧。 否正确正规科研抗体品牌零售代理商家。闵行区Merck抗体抗体代理价
对您的特定应用,增加(和优化)试剂浓度和培养时间。 检查确保检测试剂按建议的方法正确贮藏和使用。 从抗体缓冲液中除去吐温。 配制少量工作液(1mL),在暗室中加入HRP偶联二抗1mL。 应观察到可见的蓝光。 在再杂交过程中可能有抗原损失。 信号较弱 在凝胶上的蛋白不足 在凝胶上载入更多的蛋白,或在载入之前浓缩样品,或使用免疫沉淀以增加在凝胶运行的中靶蛋白量。 使膜曝光时间延长(1-2小时)。 转移到膜上的蛋白过少--优化转膜条件,如转膜缓冲液pH、膜类型和电压等。闵行区Merck抗体抗体代理价上海益启生物的联系电话。
酶联免疫吸附实验(ELISA) 是结合了抗体的特异性和简单髓分析法的高灵敏度蛋白检测方法。通过采用抗体-抗原反应,ELISA可以提供抗原或抗体浓度测量。有两种常用的ELISA形式∶双抗夫心EUSA和竞争性ELISA。图解和描述如下B。 实验中**常用的是双抗夹心ELUSA,它用于测定未知样品中的抗原浓度,是**有用的免疫分析法之一。夹心ELISA 快速且准确;并且如果提供纯化的抗原标准品,该分析法可用于生成剂量-反应曲线,用于测定未知样品中抗源的***量。
利用多肽的不同物理特征,如分子量、电荷和形状,蛋白质复合物可用电泳法(即在凝胶基质上加样并通入电流)分离。以这种方式分离蛋白质的常规方法是SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法)。通过“跑胶”,可以了解关于蛋白性质的大量信息;而通过把已 分离的蛋白样品从凝胶转移到固相载体膜上(印迹法)并采用特异性抗体进行检测,可以了解更多信息。在用Western blot检测蛋白时,运用高质量抗体对成功而言是至关重要的。 上海Sigma抗体的供应商。
在本节中,将讨论目前仍在应用中的主要免疫技术理论和实验。 免疫学研究时间轴 1900.Ehrlich提出抗体形成理论 1938.Marrack提出抗原-抗体结合假说 1962.Edelman & Porter解析抗体分子结构 1975.Kohler & Milstein开发单克隆抗体产品 1986.采用基因工程生产乙肝疫苗 1900.Landsteiner & Levine使用天然抗血清识别ABO血型 1900.Nuttall, Wasserman &Schutze 采用沉淀素试验区分人乳、牛乳和山羊乳 1900-01.Uhlenhuth 关于鸡蛋蛋白分型的工作,在医学工作中用沉淀素反应进行人血液染色铺平了道路 1942.Coons等发表IHC关键研究。抗体是采用FITC标记的 1942.Coons等发表IHC关键研究。抗体是采用FITC标记的上海益启生物的科研抗体销售电话。Upstate抗体抗体哪家优惠
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1953.Grabar & Williams发表免疫电泳的关键论文 1953.Grabar & Williams发表免疫电泳的关键论文 1965.Fulwyler发表荧光***细胞分选的论文 1971.Perlman & Engvallinvent发明ELISA 1979.Renart, Reiser & Stark描述Western免疫印迹法 1979.Horan等开发了基于微珠的抗体多元分析法 1980.Nadler发表了“血清疗法”论文,描述了采用靶向单克隆抗体进行淋巴瘤***的方法 1984.Gilmor & Lis描述ChIP Western Blot(WB) Western blotting免疫印迹法(WB)结合了凝胶电泳的分辨率与抗体检测的特异性。闵行区Merck抗体抗体代理价