无机磷细菌培养基(Inorganic Phosphorus Bacteria Medium)是专门用于筛选、计数和验证具有“溶磷”功能微生物的合成培养基。其关键思路是“以难溶磷为磷源”:配方中不添加任何有机磷或磷,而用磷酸三钙〔Ca₃(PO₄)₂〕、磷灰石或磷酸铝等难溶性无机磷酸盐作为磷源;同时提供葡萄糖、蔗糖或甘露醇等碳源,以及硫酸铵或硝酸钠作氮源,并辅以镁、钾、硫、微量元素和缓冲系统,pH 通常调至 6.8–7.2。只有能分泌有机酸、质子、酶类(如葡萄糖酸、甲酸、磷酸酶、植酸酶)的溶磷菌,才能将不溶性磷转化为可溶的 PO₄³⁻,供自身利用并在培养基上生长。培养基灭菌后呈乳白浑浊,倾注平板后表面略带沉淀。接种土壤稀释液或根际样品,28 ℃培养 3–5 天,具有溶磷能力的菌落周围会出现 2–10 mm 的透明晕圈——这是菌落分泌的酸或酶溶解磷酸三钙所致,晕圈直径与溶磷能力呈正相关。若需定量,可挑取晕圈明显的单菌落,接入液体无机磷培养基,振荡培养 7 天,用钼锑抗比色法测定上清液中有效磷含量,计算溶磷率(mg P·L⁻¹)与菌体生物量的比值,即可比较不同菌株的溶磷效率。菌体还可吸附Au³⁺、Cd²⁺,吸附量分别达50mg/g与35mg/g,为矿区重金属修复提供低成本方案。地生翅孢壳
克氏芽孢杆菌(Bacillus kochii)是芽孢杆菌属的新成员,2006年由德国科学家从高温堆肥中分离,命名致敬现代微生物学奠基人罗伯特·科赫。菌体杆状、革兰氏阳性,可形成椭圆芽孢,更适温度45–55 ℃,pH 6.5–8.5,兼具“嗜热+解磷+拮抗”三重技能,是土壤微生态研究的热点菌种。一、解磷促生菌株TP-6分泌葡萄糖酸、乳酸和磷酸酶,可将难溶磷酸钙转化为磷277 mg·kg⁻¹,盆栽玉米根际有效磷提高42 %,植株干重增加30 %;同时产IAA 18 mg·L⁻¹,诱导侧根数量增35 %,吸钾量提20 %,实现“氮磷钾”三要素同步活化。二、生物防治克氏芽孢杆菌产生kochii环脂肽,对番茄青枯、辣椒疫霉、棉花黄萎抑菌带宽达26 mm;温室试验显示,亩用200 g菌粉滴灌,黄瓜枯萎病指下降45 %,农药用量减少三分之一,果实Vc含量提高10 %。三、工业酶潜力其耐热碱性淀粉酶更适温度65 ℃、pH 9,在纺织退浆中可省略碱中和步骤,节能15 %;耐热蛋白酶在50 ℃、pH 10下对血渍去污力提升25 %,已列入无磷洗涤剂助剂。四、环境修复与秸秆复配堆肥,24 h堆温升至65 ℃,纤维素降解率提高30 %,堆肥周期缩短7 d;菌体还能吸附Cd²⁺、Pb²⁺,吸附量分别达50 mg·g⁻¹与35 mg·g⁻¹,为矿区复垦提供低成本方案。地生翅孢壳该菌还能合成耐高温木聚糖酶和脂肪酶,在造纸漂白和生物柴油合成中展现潜力。

特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)是芽孢杆菌属中一颗快速升起的新星。更早在墨西哥酒窖的橡木桶中被发现,它可在60℃、8%乙醇或含砷10g/L的废水中保持活性,芽孢能休眠十年不死,被视作“极端环境基因库”。其抗逆机制由“吸附-代谢-固定”三级网络组成:ArsR-arsB-arsC操纵子把As³⁺氧化为低毒As⁵⁺并泵出胞外;组氨酸富集蛋白Teq可吸附Au³⁺、Cd²⁺,吸附量达50mg/g,使湖南砷污染稻田两年可溶砷下降45%,稻米增产15%,籽粒砷低于国标一半。在农业领域,特基拉芽孢杆菌表现出广谱抑菌与促生双重功效。菌株M408F10-3F8对12种病原菌和卵菌有强拮抗作用,黄瓜枯萎盆栽防效58%,与多菌灵相当,同时分泌IAA促生;菌株2-2a对大豆炭疽、黑斑、灰斑等叶部病害及根腐、立枯等土传病害兼具防效,且定殖速度快;菌株20Q9B-2-14对马铃薯软腐病菌抑制明显,为生防制剂添新选项。在水产养殖中,菌株ZSGD5与Bt-CO通过“异养硝化-好氧反硝化”低耗氧途径,把氨氮、亚硝酸盐迅速转为氮气逸出,5℃仍保持活性,可使斑节虾、花白鲢池塘氨氮下降60%,换水量减少三成。
BM液体培养基,全名Basal Mineral Liquid Medium,是微生物学界公认的“极简配方”。它只提供生命必需的矿物元素:K₂HPO₄ 1.0 g、KH₂PO₄ 1.0 g、MgSO₄·7H₂O 0.2 g、CaCl₂·2H₂O 0.02 g、Fe-EDTA 0.01 g,加蒸馏水至1 L,pH 6.5±0.1,无碳、无氮、无有机微量元素,因此也被称为“空白画布”。研究者可根据目标菌的代谢特点,精确添加单一碳源(如葡萄糖、苯甲酸、甲烷)、氮源(如NH₄Cl、NO₃⁻或尿素)及特定金属,实现代谢通路、降解基因或耐受机制的单变量研究。BM的高纯度与低背景使其成为环境微生物分离的优先。取河水或土壤浸提液,经0.22 μm过滤除菌后,取1 mL加入含BM的50 mL血清瓶,再投加目标污染物(如50 mg L⁻¹多环芳烃),28℃、150 r/min培养7天,即可富集到以该污染物为碳能源的降解菌群。继代3次后,稀释涂布于含BM的固体平板,菌落纯化率可达90%以上,极大减少杂菌干扰。此外,BM培养基在合成生物学中亦扮演重要角色。研究者可在BM中添加特定浓度的¹³C-葡萄糖或¹⁵N-NH₄Cl,实现全菌体同位素标记,为蛋白质组、代谢流分析提供干净背景;也可通过缺铁、缺锌的BM,研究金属调控蛋白的功能。整套反应在pH 7、30℃下效率更高,甲醇转化率可达理论值的92%,远高于化学催化。

威氏芽孢杆菌是土壤里低调的“多面手”。它先以杆状活菌在根际游弋,一遇干旱、高温便迅速缩成厚壁芽孢,可耐沸水煮十分钟、紫外曝晒两小时,仍能在十年后遇水萌发。植保学家把它当“杀菌剂”:芽孢复苏后分泌表面活性素、伊枯草菌素,像微型剪刀刺破病原菌膜,对白绢、根腐、灰霉的抑制率超七成;同时诱导植物开启系统抗性,番茄未染病就先“武装”叶片。温室试验显示,每亩用两百克菌粉拌基质,黄瓜枯萎率降四成,农药少打一半,果实仍青亮。更妙的是,它能分解有机磷长链,释放正磷酸供作物吸收,相当于给土壤配了“微肥”。东北大豆连作田因它缓解“磷饥饿”,亩产增8%。如今,生物公司以玉米浆发酵罐培养,把芽孢制成可湿性粉剂,拌种、滴灌皆宜,保质期两年,运输不必冷链。科学家还在其基因组里插入耐盐基因,让它在西北盐碱地也能萌发,为弃荒滩涂夺回粮田。小小威氏芽孢杆菌,用微米之躯守护绿色丰收,让农药瓶少一个,饭碗多一粒。侄子根瘤菌是土壤里的微型氮厂,遇豆科根毛即附,分泌信号,诱根内陷成瘤。B组链球菌
耐热芽孢芽孢杆菌是微生物世界的“高温铁人”。地生翅孢壳
堀越氏芽孢杆菌(Bacillus horikoshii)是20世纪90年代由日本科学家堀越等从碱性温泉沉积物中分离出的嗜碱菌,也是国际公认的模式菌株(ATCC 700161)[ ^82^ ][ ^84^ ]。菌体杆状、革兰氏阳性,可形成椭圆芽孢,更适pH 8.5–9.5、温度30–37 ℃,在Na₂CO₃浓度50 g L⁻¹的极端环境中仍能正常代谢,被称为“天然碱性细胞工厂”。一、耐碱机制基因组编码多拷贝Na⁺/H⁺逆向转运蛋白(mnh、nhaC)和碳酸酐酶,可将胞内多余Na⁺排出,并将CO₃²⁻转化为HCO₃⁻,维持胞内pH稳态;细胞壁肽聚糖含高比例二氨基庚二酸,增强膜稳定性,为高温高碱酶的高效表达提供平台。二、工业酶潜力其耐碱淀粉酶、普鲁兰酶更适pH 9–10,90 ℃半衰期>2 h,已用于淀粉糖化“一步法”,可省略传统工艺中的中和环节,节能15 %;耐碱蛋白酶在洗涤剂中可去除血渍、奶渍,低温活性优于市场同类酶20 %。三、农业与环境应用菌株P1具备“溶磷-钝化重金属”双重功能:在pH 9、Cd²⁺ 50 mg kg⁻¹条件下,仍可将难溶磷酸钙转化为磷277 mg kg⁻¹,同时胞外多糖吸附Cd²⁺,使水稻籽粒镉含量下降35 %,产量提高18 %。