脱盐/缓冲液置换并浓缩
5次低速离心,总耗时~35分钟
1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。
2. 优化选做:加入1.5 mL用于置换的缓冲液,1,000×g离心1 min。
3. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(有5种截留分子量规格可选)。
4. 加入1.5 mL样品,4,000×g离心15 min进行浓缩。
5. 加入1.5 mL需要置换的缓冲液,4,000×g离心15 min,换液的同时进行浓缩。
6. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管,1,000×g离心回收处理好的蛋白。
* 进行较大体积操作时,可以适当延长离心时间,也可参考Amicon® Pro完整操作说明书
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提供的超滤管是没有经过去内***处理的,同时由于内***通常以多聚体的形式存在,大小
在10-1000KD之间不等,在超滤的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH预清洗,随后用Milli-Q®水/缓冲液清洗的步骤去除大部分内***。关于针对Amicon®,Microcon® , Centricon®尝试过的内***去除方案。
Amicon® Ultra超滤管使用的是再生纤维素膜,这种材质是蛋白吸附比较低的超滤膜。但是对于一些疏水性蛋白或非极性蛋白,它们和膜的非特异吸附可能会增强,对于这种情况,可以尝试在实验前对超滤管进行封闭处理。也可以尝试换成Amicon® Ultra 0.5或2来进行实验,通过减小膜面积来降低非特异性吸附。 普陀区默克4ml超滤浓缩管代理价一个好的 超滤浓缩管代理销售需要具备哪些特点您知道吗?
默克密理博 Amicon® Ultra 离心式超滤管因其完美的设计,一经推出即成为生物样品操作的行业**产品。不论是蛋白、核酸、病-毒-或颗粒物,抑或低浓度样品或宝贵的活性样品,Amicon® Ultra 都能兼顾高回收率和操作的方便性及标准化,并满足下游各种应用的要求,使研究者处理样品时倍感轻松。
这款Amicon Ultra 15 mL离心式过滤器借助10 kDa NMWL的滤膜可以进行蛋白浓缩。Amicon Ultra离心式过滤器是蛋白纯化、蛋白浓缩和脱盐的理想工具。
Amicon® Ultra 超滤管的独特优点:
有效浓缩同时保证高的蛋白回收率
1.合理的死体积设计
2.避免样品离干而降低回收率
3.便于估计和控制样品浓缩倍数
4.重复性好,便于样品数据相互比较
特别推荐应用(提供实验报告作为参考)
Microcon®超滤管:
Microcon®PCR 级超滤管:
• 法医鉴定分析的DNA样品制备
• 生物大分子样品浓缩、脱盐及缓冲液置换
• 体外合成mRNA的纯化
• 以人mRNA或总RNA制备荧光DNA探针
• 游离标记物的去除
• 纳克级核酸的定量回收及大片段DNA完整性研究
• 替代乙醇沉淀,离心法高效浓缩基因组DNA
应用指南
典型应用
肽及生长因子浓缩
蛋白浓缩与脱盐
电泳等操作前的蛋白样品浓缩
HPLC前去除蛋白
组织培养抽提物和细胞裂解液中大分子成分的纯化
生物样本浓缩(抗原,抗体,酶等)
从含有SDS(或无SDS)的缓冲液中浓缩gDNA
核酸浓缩与脱盐(单链或双链核酸)
去除标记核苷酸
去除标记氨基酸
从扩增的DNA产物中去除引物
克隆前去除连接序列(linker) 益启生物公司专业 从事超滤浓缩管代理销售。
Amicon® Pro纯化超滤管简明操作指南
亲和纯化
用于纯化GST•Tag,His•Tag等重组表达蛋白及抗体,适合~0.5 mL裂解液操作
6次低速离心,总耗时~100分钟(含65分钟孵育时间)
1. 在Amicon® Pro上样池中加入200μL亲和纯化树脂(50%悬浊液)和1.5 mL漂洗缓冲液。
1,000×g离心1 min。
2. 加入0.5 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h,其间可温和搅动促进结合。
3. 1,000×g离心1 min 以去除未结合杂质。
4. 加入1.5 mL漂洗缓冲液,1,000×g离心1 min。 上海超滤浓缩管批发商。奉贤区Millipore超滤浓缩管代理商
超滤浓缩管的系列有很多。松江区Merck离心浓缩管代理价
抗体标记
适合25-200μg样品操作
5次低速离心,总耗时~50分钟
1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。
2. 加入抗体样品
• 对于比较稀释的样品(< 1 mg/mL)
- 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(建议使用50k MWCO)。
- 加上至多1 mL抗体样品, 4,000×g离心15 min。
• 对于浓度较高的的样品(≥ 1 mg/mL)
- 在Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(建议使用50k MWCO)中加入至多100μL样品。
- 将装有样品的Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管接在Amicon®Pro上样池的下端。
3. Amicon®Pro上样池内加入预先准备好的1.5 mL含有染料的反应混合液。
4. 4,000×g离心15 min。
5. 优化选做:将样品在室温下多孵育30 min。
6. 上样池中加入1.5 mL PBS± NaN3。
7. 4,000×g离心15 min换液同时浓缩。
8. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管1,000×g离心回收标记好的抗体。 松江区Merck离心浓缩管代理价
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