超滤(UF)常用于分离溶液中极其微小的颗粒和不溶分子。虽然分离效果受到包括化学性质、电荷等多种因素影响,这种方法主要还是以分子大小为**基本的考虑。超滤膜截留1-1000kDa(MW)的分子,盐和水等小分子会透过,因此在大分子样品处理中得到了应用。胶状或微粒状物质也能够被截留。UF膜既可以用于透过样品也用于保留样品的纯化。样品***小于膜孔径,则经过膜处理可以达到除热源、澄清和与大分子污染物的分离的效果。如果目的分子远远大于膜孔径,膜处理则可以将小分子污染物去除而目的分子被浓缩。超滤方法相比沉淀法对于样品更温和,没有发生容易导致生物大分子失活的相变,而且在浓缩的同时可以完成对溶质的除盐。超滤的应用不限于蛋白样品的操作,也常用于核酸样品制备,包括分子克隆和质粒纯化。DNA和RNA样品起始浓度低至5ng/mL也可以被高效地在数分钟内被浓缩,回收率达到99%以上。超滤浓缩管的主要优势是什么。无锡默克超滤浓缩管哪家好
特点与优点:
高产:没有样品转移,损失更少
温和:特别的渗滤设计使换液过程更温和
快速:从细胞裂解到纯化、优化一共*需要5次低速离心
灵活:一种离心方法,***支持各种样品制备所需
蛋白缓冲液置换、脱盐和透析
每一种蛋白的制备都是***的,常常需要摸索和优化。应该考虑为特定蛋白选择相应的工具进行换液和透析。您可以从操作较快 Amicon® Pro 的渗滤法或更温和的 D-Tube™透析法中选择更适合样品的操作方法。
选择更直接而有效的方法!
Amicon® Pro能做到一步离心完成脱盐换液 宝山区默克15ml超滤浓缩管益启生物公司作为上海一家专业从事 超滤浓缩管代理销售。
特别推荐应用(提供实验报告作为参考)
Microcon®超滤管:
Microcon®PCR 级超滤管:
• 法医鉴定分析的DNA样品制备
• 生物大分子样品浓缩、脱盐及缓冲液置换
• 体外合成mRNA的纯化
• 以人mRNA或总RNA制备荧光DNA探针
• 游离标记物的去除
• 纳克级核酸的定量回收及大片段DNA完整性研究
• 替代乙醇沉淀,离心法高效浓缩基因组DNA
应用指南
典型应用
肽及生长因子浓缩
蛋白浓缩与脱盐
电泳等操作前的蛋白样品浓缩
HPLC前去除蛋白
组织培养抽提物和细胞裂解液中大分子成分的纯化
生物样本浓缩(抗原,抗体,酶等)
从含有SDS(或无SDS)的缓冲液中浓缩gDNA
核酸浓缩与脱盐(单链或双链核酸)
去除标记核苷酸
去除标记氨基酸
从扩增的DNA产物中去除引物
克隆前去除连接序列(linker)
抗体标记
适合25-200μg样品操作
5次低速离心,总耗时~50分钟
1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。
2. 加入抗体样品
• 对于比较稀释的样品(< 1 mg/mL)
- 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(建议使用50k MWCO)。
- 加上至多1 mL抗体样品, 4,000×g离心15 min。
• 对于浓度较高的的样品(≥ 1 mg/mL)
- 在Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(建议使用50k MWCO)中加入至多100μL样品。
- 将装有样品的Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管接在Amicon®Pro上样池的下端。
3. Amicon®Pro上样池内加入预先准备好的1.5 mL含有染料的反应混合液。
4. 4,000×g离心15 min。
5. 优化选做:将样品在室温下多孵育30 min。
6. 上样池中加入1.5 mL PBS± NaN3。
7. 4,000×g离心15 min换液同时浓缩。
8. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管1,000×g离心回收标记好的抗体。 上海超滤浓缩管代理销售电话多少?
外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理
已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤,这个时候考虑到得率,应该采用离心法处理,以减少过滤时的外泌体样品损失。
超滤方法纯化具体操作步骤举例
Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO)
用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]
用PBS平衡Amicon® Ultra-15 超滤管(目录号UFC901024,10 kDa MWCO) ,4000g离心 X 10 min。
从超滤管内管及收集管吸走PBS。向超滤管加入15 mL 样品。4000g 离心30 min 浓缩。倒空收集管。加入14 mL PBS 进行缓冲液置换,温柔吸打样品数次。4000g离心 30 min。从浓缩管吸回处理好的样品。(30X 浓缩)
注意 : 所有 Amicon® Ultra 超滤管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 与此操作流程兼容 * 超滤浓缩管和其他的空压机有什么区别呢?长宁区默克超滤浓缩管咨询问价
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近年来随着分离纯化技术的提高,关于外泌小体的研究成果颇丰;这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索,已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求,以及起始样品的规模、数量,可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒,对操作人员也没有特别的经验要求,超滤法后来居上,成为实验室中制备外泌体的通用方法。无锡默克超滤浓缩管哪家好
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