蛋白亲和纯化(无需换液和浓缩)
* 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管~1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法,但溶液体积和离心时间等需要略加优化。
3次低速离心,总耗时~75分钟(含60分钟孵育时间)
1. 在Amicon® Pro上样池中加入至多1000μL亲和纯化树脂(沉降的柱床体积)和至多9 mL漂洗缓冲液。1,000×g离心1 min平衡树脂。(柱床)树脂量≥ 500μL时采用2,000×g离心4 min。
2. 加入至多9 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h*,其间可温和搅动促进结合。 上海超滤浓缩管销售公司。浦东新区Millipore超滤浓缩管订购
经典离心浓缩装置
Amicon® Ultra 离心超滤管
反转离心回收
•反转离心回收设计使蛋白样品,特别是小体积样品高效
回收,避免***头吸取造成的样品丢失或操作错误
•0.5mL、2mL 和 70mL 超滤管设计为反转回收模式
样品吸附损失小
•Ultracel® 超滤膜为密理博超滤产品特有的设
计,非特异吸附比较低,减少样品的吸附损失
•膜和聚丙烯管都是低吸附材质,保证> 90%
回收率
•竖膜切向流设计,不像横膜那样容易堵,样品
损失少
•浓缩速度超快,**少*需 10 分钟
常州默克4ml超滤浓缩管咨询报价Millipore超滤浓缩管用于蛋白超滤、浓缩、除盐!
外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理
已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤,这个时候考虑到得率,应该采用离心法处理,以减少过滤时的外泌体样品损失。
超滤方法纯化具体操作步骤举例
Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO)
用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]
用PBS平衡Amicon® Ultra-15 超滤管(目录号UFC901024,10 kDa MWCO) ,4000g离心 X 10 min。
从超滤管内管及收集管吸走PBS。向超滤管加入15 mL 样品。4000g 离心30 min 浓缩。倒空收集管。加入14 mL PBS 进行缓冲液置换,温柔吸打样品数次。4000g离心 30 min。从浓缩管吸回处理好的样品。(30X 浓缩)
注意 : 所有 Amicon® Ultra 超滤管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 与此操作流程兼容 *
温和的高浓度样品浓缩、脱盐装置
Amicon® stirred cells 搅拌式超滤杯
Amicon® stirred cells 搅拌式超滤装置对于高浓度(达 **分子溶液快速浓缩和脱盐提供了的可行方法。做蛋白浓缩时,向超滤装置中导入气压,大于超滤膜截留分子量的溶质将被截留在容器内,水及小于超滤膜截留分子量的溶质(如盐分)会被过滤并排出。加压拌式设计防止浓缩的样品发生沉淀,比离心超滤温和,对于高浓度、易沉淀样品的进一步浓缩同时脱盐等应用是比较好选择。配套选择的超滤膜可以灭菌并经处理后反复使用,更为经济。 益启生物公司主要超滤浓缩管代理销售。
无血清样品选择 3kDa 孔径是为了尽可能提高外泌体的回收率。
有血清样品选择100kDa/500kDa孔径是为了尽可能去除细胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌体的白蛋白造成的影响。
研究者可根据样品的粘稠程度,以及需要制备的目标外泌体 / 囊泡 / 颗粒的大小分布来选择和优化超滤孔径(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa),以便达到更好的得率和操作体验。
样品体积大于 30mL 时可以考虑用超滤杯或 Centricon-70 超滤管,请注意搅拌式超滤杯在200mL 以内时吸附损耗可能较离心式超滤管略偏高。如需进一步提高特定外泌体的纯度,可选用包被相应抗体的磁珠进行亲和纯化精制。 上海 超滤浓缩管代理销售推荐益启生物公司。青浦区默克2ml超滤浓缩管订购
超滤浓缩管的好处有很多。浦东新区Millipore超滤浓缩管订购
超滤(UF)常用于分离溶液中极其微小的颗粒和不溶分子。虽然分离效果受到包括化学性质、电荷等多种因素影响,这种方法主要还是以分子大小为**基本的考虑。超滤膜截留1-1000kDa(MW)的分子,盐和水等小分子会透过,因此在大分子样品处理中得到了应用。胶状或微粒状物质也能够被截留。UF膜既可以用于透过样品也用于保留样品的纯化。样品***小于膜孔径,则经过膜处理可以达到除热源、澄清和与大分子污染物的分离的效果。如果目的分子远远大于膜孔径,膜处理则可以将小分子污染物去除而目的分子被浓缩。超滤方法相比沉淀法对于样品更温和,没有发生容易导致生物大分子失活的相变,而且在浓缩的同时可以完成对溶质的除盐。超滤的应用不限于蛋白样品的操作,也常用于核酸样品制备,包括分子克隆和质粒纯化。DNA和RNA样品起始浓度低至5ng/mL也可以被高效地在数分钟内被浓缩,回收率达到99%以上。浦东新区Millipore超滤浓缩管订购
上海益启生物科技有限公司总部位于漕宝路400号明申商务广场907、908,是一家 从事生物科技(除生物试剂)领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让;室内外装潢;建筑工程设计与施工;展览展示服务;计算机及配件、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、民用物品、易制毒化学品)实验室设备、服装服饰及辅料、仪器仪表、电子数码产品、普通劳防用品、文体用品的销售。的公司。益启生物作为 从事生物科技(除生物试剂)领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让;室内外装潢;建筑工程设计与施工;展览展示服务;计算机及配件、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、民用物品、易制毒化学品)实验室设备、服装服饰及辅料、仪器仪表、电子数码产品、普通劳防用品、文体用品的销售。的企业之一,为客户提供良好的试剂,耗材,科研试剂,仪器设备。益启生物不断开拓创新,追求出色,以技术为先导,以产品为平台,以应用为重点,以服务为保证,不断为客户创造更高价值,提供更优服务。益启生物始终关注自身,在风云变化的时代,对自身的建设毫不懈怠,高度的专注与执着使益启生物在行业的从容而自信。