通量(超滤效率)及其影响因素
超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得比较好的效果。滤膜的
通量的定义是流量除以面积,使用高 NMWL 滤膜可以增加通量,但同时
会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参
与影响通量的因素很多,包括:
压力:较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时,流量随着跨膜压力
(TMP)的增大而增加。正压条件下操作,如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯,
这种因素影响较为明显。如果极化影响***,通量会达到一个平台,甚
至可能随着压力的增加而降低。 您了解 超滤浓缩管的优势吗?静安区默克15ml超滤浓缩管代理商
蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的**终浓度不超过
20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白,建议的改进方法是:
1)离心力降为推荐离心力的30%-50%
2)改用截留分子量更大的超滤管(如原本选用10k,此时可以选择30k) 3)在浓缩过程中取出超滤管,用***头反复吹吸几次后再继续浓缩
Amicon® Ultra超滤膜中含有微量甘油。如果出现这种情况,请先用0.1 N NaOH清洗再离心。***用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用,如暂时不用,请保持润湿状态,避免重新干燥。 长宁区默克0.5ml超滤浓缩管联系人益启生物公司作为上海一家专业从事 超滤浓缩管代理销售。
特点与优点:
高产:没有样品转移,损失更少
温和:特别的渗滤设计使换液过程更温和
快速:从细胞裂解到纯化、优化一共*需要5次低速离心
灵活:一种离心方法,***支持各种样品制备所需
蛋白缓冲液置换、脱盐和透析
每一种蛋白的制备都是***的,常常需要摸索和优化。应该考虑为特定蛋白选择相应的工具进行换液和透析。您可以从操作较快 Amicon® Pro 的渗滤法或更温和的 D-Tube™透析法中选择更适合样品的操作方法。
选择更直接而有效的方法!
Amicon® Pro能做到一步离心完成脱盐换液
Minicon®浓缩器
Minicon® 浓缩器用于在电泳或免疫电泳分析前对尿液和脑脊液进行浓缩,以增强对不正常或病态的蛋白质(例如尿中的 Bence Jones 蛋白)的识别。B15型有 8 个浓缩单元,用于 5mL 样本的处理;CS15型有 10 个浓缩单元,适合 2.5mL 样品的处理。溶剂和盐分通过超滤被吸收剂吸收而样品被浓缩。
优点与应用
静态浓缩器,不需要其它辅助装置
浓缩倍数达到 100 倍,样品终体积小
同时浓缩多个临床样品
特别推荐用于尿液、脑脊液等的蛋白
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核苷酸截留分子量(NCO)
超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的,适合各种蛋白研究,但在核酸
和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏
过,相对于球形蛋白需要更致密的膜(截留分子量更小)。所以选择
滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。
浓差极化
浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞,产生除了膜本身截留分
子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时,会形成相当于第二层滤膜作
用的胶体层,干扰分子通过滤膜,同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分
也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。
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如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话,那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响浓缩效果,建议选用上一分子量级别的超滤管(如原本选用30k,此时可以选择10k)。
2)如果目的样本也不在滤过液中,那么:
a)蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL? b)用来确定样本浓度的方法是什么?是否可信?
c)目的蛋白是不是沉淀了?如果是的,具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。 静安区默克15ml超滤浓缩管代理商
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