IHC 是从根词immuno"(与在操作中所用的抗体有关)和"histo"(意思是"组织")而得其名称。与之不同,免疫细胞化学(ICC)的根词是"cyto"(意思是"细胞"),是以培养或分离的细胞代替组织进行的。IHC和ICC广泛应用于基础研究,目的是了解生物标记物的分布和定位以及在生物组织或细胞中差异表达的蛋白。
在IHC/ICC中的主要步骤如下∶·样本制备·抗原修复· 抗体染色·抗体检测
成功的IHC实验取决于高质量抗体选择和合遇的实验浓度。每一种抗体都要根据实际的实验情况进行优化。即使是同一反应体系,针对不同的抗体适合的稀释浓度也是不同的。实验者可以以说明书上推荐的稀释倍数作为参考。
SNAPi.d.⑧2.0IHC加速器带来的主要改进·直观的设计,将封闭、洗涤、抗体孵育及标记等步骤结合起来· 不需要使用石蜡笔·抗体可以收集后继续使用
·切片操作时间大幅减少,洗涤步骤耗时大幅减少,可同时操作多达24涨切片
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与技术支持部门协商,以便进行适当的方案修改。校准移液管
确认在所有洗涤步骤中所有试剂都已完全***。见上文。
在所有解育步骤中应采用垂直微孔板振彩器振高做孔板,其速度应使横珠处于怛定运动状态,但不引起飞践。当再使用封闭剂时,检查没有任例试养触及封闭剂。
当使用相同移液器吸头对不同孔添加试剂判应小心,移液器眼头不得触及微孔板中的试剂。
免疫组织化学/免疫细胞化学(IHC/ICC)、免疫组织化学(IHC)是指通过特异性抗体-抗原相互作用,检测在组织切片中目标抗原(如蛋白)的过程。 奉贤区WB抗体抗体商家益启生物是Sigma抗体的代理商。
在将进行ChIP咳PCR实验的地点期近,不得打开含有扩增PCR产物约试幢。
确保您使用的抗体是在ChIP中给证过的抗体。关于ChIP抗体约完整选择过程,请参见默克官网表观遗传学。如果您正使用ChIP抗体,请增加抗体的解育时间。 一般1-10uq ChIP抗体是足够的。但是,所需抗体量可能取决于您的靶轮蛋白相对丰度和抗体与靶标的亲和力。 在交联前,单独准备一个平板,用于测定细胞数。重新评价每个反应的细您数。增加您的细晚数,特别是在尝试检测较任丰度的靶蛋白时。
在保存抗体时请注意以下几点:
为保持比较大反应性,应按照厂家说明书保存试剂(如,当指定保存温度为2-8℃时,应避免将抗体置于室温下)。保存抗体的经验法则是将其置于非无霜冰箱/制冷机内的严格密封容器中,远离组织固定剂和交联试剂。除非加入稳定蛋白,如BSA(1% w/v),否则抗体不得
在工作液中长期保存。避免长期保存稀释的抗体。保存时遇到的主要问题是细菌或***污染。
如果抗体保存在2-8℃超过2-3天,建议进行过滤除菌和/或加入抑菌剂/防腐剂,如0.05%叠氮化钠或0.1%硫柳汞。 科研**抗体保证质量-益启生物公司。
非特异性条带 抗体(一抗或二抗)浓度过高 降低抗体浓度。
SDS可能引起对固定蛋白条带的非特 转膜后,振荡洗涤
异性结合 在操作过程中不使用SDS。
条带扩散 抗体(一抗或二抗)浓度过高 降低抗体浓度。
在凝胶上载入过多蛋白 减少蛋白上样量。
黑色印迹,白色条带, 抗体(一抗或二抗)浓度过高 减少抗体浓度,特别是HRP偶联的二抗。
或信号快速减少
免疫沉淀
采用抗体-抗原沉淀(又叫免疫沉淀(IP))的方法将特异性蛋白从细胞或组织裂解液中分离出来。
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对每种细胞类型或组织焚型单壮优化表解,使用l化试管或低吸附试管。确保所有试剂都是新鲜配制的,且没有污染物。增加洗涤次数。运行一次"无DNA"PCR反应,以确定您的样品是否被核酸污染。
使用PCR的**移液管;在设置PCR之前,使用紫外性照射移液管。采用**移液管,在三个不同的房间/区域进行ChIP、DNA纯化和PCR反应设置,或在遇风期内设置反应。 避免使用票装水或其它形式的预包装水。使用从含有紫外光源的Mll-QR系统中制造的水。使用防雾移液管吸头。 奉贤区H3抗体抗体哪家好