电泳的应用:1.聚丙烯酰胺凝胶电泳可用做蛋白质纯度的鉴定.聚丙烯酰胺凝胶电泳同时具有电荷效应和分子筛效应,可以将分子大小相同而带不同数量电荷的物质分离开,并且还可以将带相同数量电荷而分子大小不同的物质分离开。其分辨率远远高于一般层析方法和电泳方法,可以检出10-9~10-12g的样品,且重复性好,没有电渗作用。2.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可测定蛋白质分子量.其原理是带大量电荷的SDS结合到蛋白质分子上克服了蛋白质分子原有电荷的影响而得到恒定的荷/质比。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测蛋白质分子量已经比较成功,此法测定时间短,分辨率高,所需样品量极少(1~100μg),但只适用于球形或基本上呈球形的蛋白质,某些蛋白质不易与SDS结合如木瓜蛋白酶,核糖核酸酶等,此时测定结果就不准确。前处理在电泳涂装中是不可或缺的。吴中亮光电泳强
电泳中开始的撑持介质是滤纸和醋酸纤维素膜,当前这些介质在实验室现已应用得较少。在很长一段时刻里,小分子物质如氨基酸、多肽、糖等通常用滤纸或纤维素、硅胶薄层平板为介质的电泳进行别离、剖析,但当前则通常运用更活络的技能如HPLC等来进行剖析。这些介质适合于别离小分子物质,操作简略、便利。但关于杂乱的生物大分子则别离作用较差。凝胶作为撑持介质的引进促进了电泳技能的开展,使电泳技能成为剖析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手法之一。太仓外观件电泳企业利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。
在电泳加工前处理的工艺中有:除油、除锈、磷化、表调等工序的互相配合。可以说前处理在电泳涂装中是不可或缺的,它关系着之后电泳后电泳漆槽液的稳定性和工件表面涂膜的质量。电泳加工为获得电泳工件涂层涂膜的耐久性、耐腐蚀性,都采用磷化处理作为涂装的前处理。磷化处理(又称磷酸盐化学处理)是利用磷酸的离解(平衡)反应在清洗(脱脂)过的金属底材表面上析出不溶性的磷酸金属盐的(磷化膜)技术。磷化膜的功能是提高涂布在其上的涂膜(电泳涂膜)的附着力和耐蚀性。
支持介质的筛孔大小对待分离生物大分子的电泳迁移速度有明显的影响。在筛孔大的介质中泳动速度快,反之,则泳动速度慢。电泳喷涂的工艺流程: 工件上挂(不锈钢、铝、铜)→超声波除蜡除油→水洗→纯水洗→纯水洗→红铜色电泳 漆→纯水洗→纯水洗→纯水洗→烘干→下挂。各段工艺控制要点:1、工件成型后在上挂之前,表面应先经过接丝或者化学抛光后,再进行红铜色电泳涂装。2、上挂:要求挂具清洁,接触点好,工件牢靠不晃动。3、超声波除油除蜡:以K-106A超声波**除油除蜡剂为例,按K-106A: 纯水=1:5 比例进行配槽,其温度控制在 0~50℃,时间选择在 1~10min。4、纯水洗:纯水质量要严格控制电导率〈5μs/cm,而且进槽前后一道水洗槽内电导率不 得高于 10μs/cm。5、红铜色电泳:以K-8087 聚氨脂丙烯酸阴极电泳漆为例,配槽比例。油性色浆 KLK-8262 红铜**浆比 KLL-8087 树脂=1 比 30~40,再 按树脂和色浆总和我五倍加入纯水,循环熟化进行生产,熟化时间为 24 小时。施工电压选 择 30~100V;施工时间选择:20~90S;槽液温度:28±2℃。电泳分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。
电泳槽是电泳系统的主要部分,根据电泳的原理,电泳支持物都是放在两个缓冲液之间,电场通过电泳支持物连接两个缓冲液,不同电泳采用不同的电泳槽.常用的电泳槽有:(1)圆盘电泳槽:有上,下两个电泳槽和带有铂金电极的盖。上槽中具有若干孔,孔不用时,用硅橡皮塞塞住.要用的孔配以可插电泳管(玻璃管)的硅橡皮塞。电泳管的内径早期为5~7mm,为保证冷却和微量化,现在则越来越细.(2)垂直板电泳槽:垂直板电泳槽的基本原理和结构与圆盘电泳槽基本相同。差别只在于制胶和电泳不在电泳管中,而是在块垂直放置的平行玻璃板中间。(3)水平电泳槽:水平电泳槽的形状各异,但结构大致相同。一般包括电泳槽基座,冷却板和电极。电泳可以提高劳动效率。吴中亮光电泳强
利用电泳可以分离带不同电荷的溶胶。吴中亮光电泳强
影响电泳分离的主要因素: 1.待分离生物大分子的性质。待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说,子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形,则其电泳迁移速度越快。2.缓冲液的性质。缓冲液的pH值会影响待分离生物大分子的解离程度,从而对其带电性质产生影响,溶液pH值距离其等电点愈远,其所带净电荷量就越大,电泳的速度也就越大,尤其对于蛋白质等两性分子,缓冲液pH还会影响到其电泳方向,当缓冲液pH大于蛋白质分子的等电点,蛋白质分子带负电荷,其电泳的方向是指向正极。为了保持电泳过程中待分离生物大分子的电荷以及缓冲液pH值的稳定性,缓冲液通常要保持一定的离子强度,一般在0.02-0.2,离子强度过低, 则缓冲能力差,但如果离子强度过高,会在待分离分子周围形成较强的带相反电荷的离子扩散层(即离子氛),由于离子氛与待分离分子的移动方向相反,它们之间 产生了静电引力,因而引起电泳速度降低。另外缓冲液的粘度也会对电泳速度产生影响。吴中亮光电泳强
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