SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可测定蛋白质分子量。其原理是带大量电荷的SDS结合到蛋白质分子上克服了蛋白质分子原有电荷的影响而得到恒定的荷/质比。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测蛋白质分子量已经比较成功,此法测定时间短,分辨率高,所需样品量极少(1~100μg),但只适用于球形或基本上呈球形的蛋白质,某些蛋白质不易与SDS结合如木瓜蛋白酶,核糖核酸酶等,此时测定结果就不准确。聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于蛋白质定量。电泳后的凝胶经凝胶扫描仪扫描,从而给出定量的结果.凝胶扫描仪主要用于对样品单向电泳后的区带和双向电泳后的斑点进行扫描。在电泳流水线的工作时,是会有一定量的废气所产生的。嘉兴镁合金电泳单位
聚丙烯酰胺凝胶电泳结果不正常现象和对策:1.指示剂前沿呈现两边向上或向下的现象。向上的“微笑”现象说明凝胶的不均匀冷却,中间部分冷却不好,所以导致凝胶中分子有不同的迁移率所致。这种情况在用较厚的凝胶以及垂直电泳中时常发生。向下的“皱眉”现象常常是由于垂直电泳时电泳槽的装置不合适引起的,特别是当凝胶和玻璃板组成的“三明治”底部有气泡或靠近隔片的凝胶聚合不完全便会产生这种现象。2.“拖尾”现象是电泳中常见的现象。这常常是由于样品溶解不佳引起的,克服的办法是在加样前离心,选用合适的样品缓冲液和凝胶缓冲液,加增溶辅助试剂。另一方法是降低凝胶浓度。昆山锌合金电泳加工电泳中的电场强度是指每厘米的电位降。
移动界面电泳是将被分离的离子(如阴离子)混合物置于电泳槽的一端(如负极),在电泳开始前,样品与载体电解质有清晰的界面。电泳开始后,带电粒子向另一极(正极)移动,泳动速度较快的离子走在较前面,其他离子依电极速度快慢顺序排列,形成不同的区带。只有一个区带的界面是清晰的,达到完全分离,其中含有电泳速度很快的离子,其他大部分区带重叠。区带电泳是在一定的支持物上,于均一的载体电解质中,将样品加在中部位置,在电场作用下,样品中带正或负电荷的离子分别向负或正极以不同速度移动,分离成一个个彼此隔开的区带。区带电泳按支持物的物理性状不同,又可分为纸和其他纤维膜电泳、粉末电泳、凝胶电泳与丝线电泳。
电场强度也是影响电泳分离的因素。电场强度(V/cm)是每厘米的电位降,也称电位梯度。电场强度越大,电泳速度越快。但增大电场强度会引起通过介质的电流强度增大,而造成电泳 过程产生的热量增大。电流在介质中所做的功(W)为:W=I2.R.t式中:I为电流强度,R为电阻,t为电泳时间。电流所作的功绝大部分都转换为热,因而引起介质温度升高,这会造成很多影响:1、 样品和缓冲离子扩散速度增加,引起样品分离带的加宽;2、 产生对流,引起待分离物的混合; 3、 如果样品对热敏感,会引起蛋白变性; 4、 引起介质粘度降低、电阻下降等等。电泳中产生的热通常是由中心向外周散发的,所以介质中心温度一般要高于外周,尤其是管状电泳,由此引起**部分介质相对 于外周部分粘度下降,摩擦系数减小,电泳迁移速度增大,由于**部分的电泳速度比边缘快,所以电泳分离带通常呈弓型。降低电流强度,可以减小生热,但会延长电泳时间,引起待分离生物大分子扩散的增加而影响分离效果。所以电泳实验中要选择适当的电场强度,同时可以适当冷却降低温度以获得较好的分离效果。影响电泳移动的一个重要因素是电渗。
电泳介质的pH值:溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少.对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种蛋白质的有效分离.为了保证电泳过程中溶液的pH值恒定,必须采用缓冲溶液。缓冲液的离子强度:溶液的离子强度是指溶液中各离子的摩尔浓度与离子价数平方的积的总和的1/2.带电颗粒的迁移率与离子强度的平方根成反比。低离子强度时,迁移率快,但离子强度过低,缓冲液的缓冲容量小,不易维持pH恒定.高离子强度时,迁移率慢,但电泳谱带要比低离子强度时细窄。通常溶液的离子强度在0.02~0.2之间。圆盘电泳槽:有上,下两个电泳槽和带有铂金电极的盖。嘉兴镁合金电泳单位
电泳所需的仪器有:电泳槽和电源。嘉兴镁合金电泳单位
电泳中杂离子的增多,槽液直观反应的一个因素就是电导率的升高。电导率升高,电泳时反 应剧烈,漆膜表面容易产生其他的现象,而对于红铜色容易颜色发花,所以要严格控制杂质带入量 , 对于清洗水要求电导率要小于 10μs/cm,对于配槽用纯水要求导率小于 5μs/cm。电导率过 高,可以通过排放超滤液来降低电导率。电泳在确定的条件下,带电粒子在单位电场强度作用下,单位时间内移动的距离(即迁移率)为常数,是该带电粒子的物化特征性常数。不同带电粒子因所带电荷不同,或虽所带电荷相同但荷质比不同,在同一电场中电泳,经一定时间后,由于移动距离不同而相互分离。分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。嘉兴镁合金电泳单位
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