蛋白纯化仪,蛋白纯化方法之凝胶过滤色谱:4.凝胶柱的填装凝胶色谱柱与其它色谱方法不同,溶质分子与固定相之间没有力的作用,样品组分的分离完全依赖于他们各自的流速差异。装住时关住柱子下口,在柱内加入约1/3柱床体积的水或缓冲液,然后沿着柱子一侧将缓冲液中的凝胶搅拌均匀,缓慢并连续的一次性注入柱内。待凝胶沉积约5厘米左右时,打开柱子下口,控制流速在1ml/min。5.样品的处理与上样根据样品的类型和纯化分析,需要选择合适的缓冲液,为了达到良好的分析效果,上样量必须保持在较小的体积,一般为柱床体积的1%~5%,蛋白质样品上样前应进行浓缩,使样品浓度不大于4%(样品浓度与分配系数无关),但需要注意的是,较大分子量的物质,溶液粘度会随浓度增加而增大,使分子运动受限,影响流速。上样前,样品要经滤膜过滤或离心,除去可能堵塞色谱柱的杂质。用于纯化蛋白的蛋白纯化仪哪个好?广东类似AKTA蛋白纯化仪
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蛋白纯化仪蛋白纯化方法之离子交换技术:案例介绍,离子交换是蛋白纯化中的重要手段,即可以用于捕获阶段,也可以用于精纯阶段。预处理和装柱1.将超纯水与沉降胶按1:3比例悬浮,轻轻搅匀;2.将色谱柱固定到设备支架上,链接出口管道,从柱底端进口反向泵入超纯水,排除管道及筛板中的气泡,停泵,然后从出口端放出部分超纯水,保留1~2cm高度超纯水,封死出口端,然后正向冲洗进口端管道和适配器,排除筛板和管道中气泡;3.通过玻璃棒引流将悬浮胶导入色谱柱,在柱上端补充部分超纯水,搅匀,装上适配器;4.将柱出口端与色谱设备连接,以0.2MPa恒压装柱,装填至恒定的柱床高度,标记柱床胶面位置,关闭泵,松开适配器,降低适配器至胶面下2mm处,继续装填,待柱床高度稳定后,标记柱床胶面位置,降低适配器至柱上标记柱床位置下2mm。固定适配器,继续装填2~3柱体积;5.确定柱体积,测量柱高,计算柱体积及记录装柱时的比较大流速;用于所有实验室规模层析柱的蛋白纯化仪。上海通用蛋白纯化仪报价
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