胎牛血清给细胞提供的益处主要体现在6个方面:1、提供细胞生长所需的天然元素或天然的生长因子。2、提供天然的结合蛋白,能识别氨基酸、脂质、金属离子和元素等,能结合并调节它们的活性。已知清蛋白(albumin)即具有上述功能,并对细胞代谢、生物合成、增殖和存活具有潜在的影响。又如胎牛血清中富含胎球蛋白(Fetuin),具有多个钙离子结合位点,因而能调节和维持血清中的钙离子浓度。3、天然含有粘附蛋白等细胞外基质成分,促进细胞的附着、铺展。4、提供消毒功能。这主要通过血清中的某些蛋白与有毒的金属离子结合来完成的。如金属硫蛋白,对多种重金属有高度亲和性,并可清理细胞生长环境中的氧自由基(·O),具有很强的抗氧化活性,可防止细胞衰老。5、提供酸碱度缓冲的作用,以及维持渗透压。6、提供蛋白酶抑制剂,使细胞免受蛋白酶的损伤。因此在细胞消化时,常用含血清的培养液终止胰酶对细胞的作用。胎牛血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。淮安食蟹猴血清
胎牛血清使用中的常见问题:如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。衢州哺乳动物细胞生长培养基胎牛血清的贴壁因子有助于细胞贴壁,并提供结合蛋白。
为什么使用胎儿血清而不是新生儿血清或成人血清?胎儿血清含有较多的生长因子,丙种球蛋白(即抗体)含量较低,非胎儿血清也有。这些很重要,因为生长因子促进细胞存活和增殖,而抗体可以与培养的细胞结合。此外,与成人或新生儿相比,胎儿血清中的补体蛋白(补体)含量较低。这些补体具有溶解培养细胞和干扰免疫测定的不良作用。血清和血浆均来自全血,通过离心去除包括红细胞在内的成分。血浆和血清之间的区别在于,凝血蛋白存在于血浆中,但已从血清中去除。血浆一般是通过在离心前向血液中加入抗凝剂来制备的,但不会去除凝血蛋白。通过在离心前使血液凝固或通过普遍/渐进离心来制备血清。因此,与凝血相关的纤维蛋白原和蛋白质不存在于血清中。
血清和血浆均来自全血,通过离心去除包括红细胞在内的成分。血浆和血清之间的区别在于,凝血蛋白存在于血浆中,但已从血清中去除。血浆一般是通过在离心前向血液中加入抗凝剂来制备的,但不会去除凝血蛋白。通过在离心前使血液凝固或通过普遍/渐进离心来制备血清。因此,与凝血相关的纤维蛋白原和蛋白质不存在于血清中。在人类中,以下22种蛋白质占血清和血浆总蛋白质含量的99%:白蛋白、总IgG、转铁蛋白、纤维蛋白原、总IgA、α-2-巨球蛋白、总IgM、α-1-抗胰蛋白酶、C3补体、结合球蛋白、α-1-酸性糖蛋白、载脂蛋白-B、载脂蛋白-A1、脂蛋白(a)、因子H、铜蓝蛋白、C4补体、补体因子B、前白蛋白、C9补体、C1q补体和C8补体。剩下的1%包括数百种蛋白质。更丰富的血清蛋白白蛋白,浓度为50mg/ml,约占总蛋白质量的一半。血清根据血红蛋白含量的不同,表现的颜色也不一样。
胎牛血清使用中的常见问题:血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。实验室如何选择适合的血清?国内一致认为HYCLONE的血清是更好的,但是根据我在北美的经历,国外一般认为GIBCO比HYCLONE好,所以并不是价格决定质量,但是总的来说这两种价格普遍偏贵,一般不是太娇气的细胞,国产的就够用了。此外,由于国内HYCLONE,GIBCO并没有生产线,我们只能从代理商那里买,而代理商又鱼龙混杂,所以买到假货的可能性也很大。由于胎牛血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间。衢州哺乳动物细胞生长培养基
需要长期保存的胎牛血清须储存于-20℃-70℃低温冰箱中。淮安食蟹猴血清
什么是优良的胎牛血清?外观,好的血清应是透明清亮,土黄色或棕黄色,无沉淀或极少沉淀,比较粘稠。如发现血清浑浊,不透明,含许多沉淀物,说明血清污染或血清中的蛋白质变性;若棕红色,说明血清中的血红蛋白含量太高,有溶血现象。总蛋白含量,胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,说明采集血液的牛龄偏大,不是胎牛;数值偏低,表明血清可能掺水了。血红蛋白,标准为不高于20mg/dl,颜色越红,数值越高;反之,数值越低。pH,国产血清,大多高于7.5,进口胎牛血清,大多低于7.5,具体原因未知,可能和牛龄有关,这也能用来初步鉴别血清的来源。淮安食蟹猴血清
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