外源基因导入真核细胞的方法有很多种,如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。2×HEPES缓冲盐溶液主要用于磷酸钙转染,其主要成分为HEPES,HEPES是一种非离子两性缓冲剂,能有效控制pH在范围,尤其在pH具有较好的缓冲能力,终浓度一般为mmol/L,培养液内含mmol/LHEPES 即可达到较好的缓冲能力。Leagene HEPES缓冲盐溶液(2×HeBS)是一种常用的细胞转染溶液,主要由HEPES、氯化钠、磷酸盐等组成,其**适pH值为,经过滤除菌处理。影响磷酸钙转染效率的因素主要有沉淀中DNA含量、DNA 在细胞上停留的时间、休克时间。Leagene 2xHeBS要求DNA浓度在为宜,Hela、BALB等细胞沉淀放置,CHO、DUKX、BⅡ等细胞可以通过甘油、DMSO进行热休克处理以提高转染效率。艾伟拓稳定供货注射级HEPES。广东大批量HEPES需求
在细胞培养过程中,经常少不了HEPES缓冲液。那么,HEPES缓冲液的配制和使用方法怎样呢?HEPES缓冲液是一种弱势,在开放式的培养条件中,若加入HEPES,可防止培养基内pH氧化升高,从而将PH维持在7.0左右。HEPES分子量为238.31,化学名:4-羟乙基哌嗪乙磺酸,分子式:C8H18N2O4S。HEPES常用于生物缓冲剂,pH值缓冲范围:6.8-8.2,用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂,能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L。关于HEPES缓冲溶液的配制,不同的文献资料有不同的说法。根据用途,一种是单纯的HEPES+NaOH,另一种是HEPES+盐。江苏有登记号HEPES生产厂家国内艾伟拓稳定供货注射级HEPES!
羟乙基哌嗪乙磺酸(供注射用)(HEPES)4-羟乙基哌嗪乙磺酸(简称HEPES),分子式为C8H18N2O4S。分子结构中既含有酸性的磺酸基(-SO3H),又含有两个碱性叔胺氮,所以呈现两性,可用来配制两性离子缓冲液。该缓冲溶液一般由一定量的HEPES溶于蒸馏水中,再用氢氧化钠调节pH至适当值。其pH缓冲范围一般为6.8~8.2。缓冲溶液的浓度以及外界温度对其pH值影响不大,因此能够较长时间维持稳定的pH值。因HEPES分子中的-SO3H呈现较强的酸性,易给出H+;两个叔胺氮各含有一个孤对电子,呈现碱性,可以接受H+生成季铵盐。所以磺酸基和叔胺在水溶液中互为缓冲对。而且,单个HEPES分子中的叔胺和磺酸基也可传递H+生成内盐,即两性离子。在水溶液中,HEPES分子、内盐以及磺酸基和叔胺各自产生的离子之间因H+或OH-的转移而能够相互转化建立平衡关系,凭借该平衡关系的移动来抵御外来酸碱的影响来调节溶液pH值稳定,所以具有缓冲作用,其平衡转化关系见下图。
缓冲溶液(德语:Pufferlösung;英语:buffersolution;法语:solutiontampon)指由“弱酸及其共轭碱之盐类”或“弱碱及其共轭酸之盐类”所组成的缓冲对配制的,能够在加入一定量其他物质时减缓pH改变的溶液。前述定义中之所以要两种成对物质,是因为反应可以同时朝向酸或碱来缓冲,举例醋酸与醋酸钠的混合溶液就是缓冲溶液。若加盐酸,pH不会下降太快,因为盐酸会跟醋酸钠反应,生成醋酸。相反,若加氢氧化钠,pH也不会增加太快,因为氢氧化钠会跟醋酸反应,生成醋酸钠。在许多化学反应中,缓冲溶液被用于使溶液的pH值保持恒定。缓冲溶液对生命的产生与进化具有重要意义,因为多数生物都只能在一定pH范围内生长,例如血液就是一种缓冲溶液。GMP条件下生产AVT稳定供货注射级HEPES。
生物缓冲剂在生物实验中会经常被用到,它们种类繁多,可能你需要的缓冲剂和你选的缓冲剂表面符合,实际使用时就存在一定的差异,所以选好合适的缓冲剂是很有必要的;同时,不同缓冲液差别也很大。湖北新德晟带你来聊聊Tris-HCl缓冲液与HEPES缓冲液的之间的区别。Tris-HCl缓冲液Tris缓冲液是在生物化学研究中使用较***的一种缓冲剂,其本身为弱碱,常用有效pH在“中性”范围,Tris-HCl缓冲液:pH=7.5~8.5;Tris-磷酸盐缓冲液:pH=5.0~9.0。Tris-HCl缓冲液优点1、Tris-HCl缓冲液稳定,与生理体液的相容性好(Tris-HCl与钙、镁离子不会形成沉淀;相反,磷酸盐与钙、镁离子会产生沉淀);2、而且相同PH,相同浓度的Tris-HCl缓冲液的离子强度低,这对酶类测定尤为重要,因为大离子强度易致有些酶失活。因此,有时用Tris-HCl代替磷酸盐缓冲液,效果更好。AVT稳定供应注射级海藻糖、蔗糖、TRIS/TRIS-HCl、HEPES等生物保护剂与缓冲盐。湖南供注射用HEPES市场价格
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各种配制方法总结如下:一、500ml1MHEPES,pH=7.0Stocksolution的配制119.15gHEPES溶解在400ml蒸馏水中,加0.5~1M的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH范围是6.8~8.2),然后用蒸馏水定容至500ml,于4摄氏度保存。二、加少量盐的HEPESBuffer配方(500ml)HEPES6.5g、NaCl8.0g、Na2HPO4.7H2O0.198g、用0.5MNaOH水溶液调节pH值,***定容。三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制将1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucanordextran)和1gHEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5MNaOH调节至所需pH值,再用蒸馏水定容至100ml即可。广东大批量HEPES需求
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