外泌体的表征方法:根据药物递送系统(DDS)表征外泌体结构至关重要,因为它决定了DDS的特性,例如细胞或组织亲和力、应激反应、吸收途径和药物释放。2014年和2018年国际细胞外囊泡学会(MISEV2018)提出了外泌体(包括研究和外泌体制备)应满足的基本要求指南。在开发基于外泌体的DDS时,必须考虑数量、大小、形态、膜组成和蛋白质(包括受体)等参数。这些参数表征所用的技术主要为光学、非光学和微流体技术。外泌体的表征方法之非光学方法:FTIR光谱和衰减全反射FTIR(ATR-FTIR)常用于外泌体质量量化和脂质和蛋白质含量的总体估计。使用TRPS,可以同时测量大小、浓度和zeta电位。由于扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜的成本较高,近些年来,一种新型的纳米粒度分析仪器在外泌体研究领域迅速发展,比如:粒度分析仪可以不只可以进行单颗粒检测,颗粒粒径检测还可以检测细胞外泌体的浓度、zeta电位、形态等进行多维度检测。外泌体可以作为一种新型的药物输送系统,利用其高度选择性的靶向性,有效地提高药物的生物利用度。济南细胞外泌体分离报价表
生物试剂Tetraspanins是常见的外泌体标志物。它们包括CD9、CD63和CD81膜蛋白。Tetraspanins参与外泌体的产生。在抗原呈递细胞中,MHC-II分子的功能通过它们整合到富含四跨膜蛋白CD9的细胞质膜区域中来调节。CD63外泌体蛋白被认为是病症的蛋白质标志物。此外,四跨膜蛋白家族的另一成员CD81在丙型肝炎的细胞进入中起重要作用。慢型丙型肝炎患者血清中的外泌体CD81会升高,表明CD81可能是丙型肝炎染上的标志物。胶质母细胞瘤表皮生长因子受体vIII(EGFRvIII)被认为是胶质母细胞瘤的标志物。关于中枢的神经系统,在脑疙瘩者血清中分离的外泌体中也检测到了EGFR、EGFRvIII和TGFβ。福州组织提取外泌体分离供货商外泌体分离是外泌体研究中的重要步骤。
外泌体分离方法优缺点对比:差速离心法:差速离心法仍是实验中常用的外泌体分离技术。主要步骤如下:1.使用离心机低速离心来去除细胞与细胞碎片。2.而后增加转速通过离心来消除样本中较大的细胞囊泡。3.再使用高速离心机进行高速离心,通过离心沉淀的方式提取外泌体。在这里,需要注意的是生物流体的粘度与分离的外泌体的纯度有较强的相关性。所以,对于高粘度的生物样品需要超速离心机进行较长时间的离心操作。外泌体分离方法之免疫分离法:免疫芯片方法基于表面外泌体受体,用于根据来源分离外泌体。获得的外泌体可直接分析或用于DNA或总RNA分离。外泌体胞内蛋白可用作分离外泌体的特异性标志物。此外,基于ELISA的ExoTEST也可以用于有效分离外泌体。其原理是:使用涂有外泌体抗体的ExoTEST板,可以从各种生物体液中分离出外泌体。该方法适用于常见和细胞类型特异性外泌体蛋白的检测、分析和定量。
分离外泌体的方法之超滤:它使用孔径为50-450nm的膜过滤器从细胞碎片和较大的EV中分离外泌体。通过使用纳米尺寸的滤膜,可以分离出目标尺寸的外泌体。超滤法通常用作超速离心的后续步骤,以及凝胶过滤和色谱的较后一步。超滤可以通过切向流过滤(TFF)或直流过滤(DFF)方法进行处理。DFF方法也称为死端过滤,存在膜污染和颗粒分离受损的问题。此外,DFF只适用于小体积样品,例如高达30mL的样品。TFF也称为错流过滤是一种更快速、高效和方便的分离大规模外泌体体积的过程,TFF是样品流体切向流过滤膜并避免形成滤饼或堵塞的过程。外泌体是一种具有细胞外信息传递功能的小囊泡。
分离外泌体的方法之密度梯度超速离心:有助于根据尺寸、结构和形态差异分离和分析纳米级材料。DGUC“细化”分离的囊泡,并使用密度为1.07g/mL或更低的密度梯度培养基。水中碘沙醇、冰冷的PBS和蔗糖是用于外泌体分离的常见梯度培养基。有市售的碘沙醇密度梯度分馏膜,用于将外泌体与非囊泡成分分离。将生物悬浮液添加到梯度培养基中,并以完整的梯度分层组分。DGUC有助于分离具有相同梯度的样品。凋亡小体、蛋白质聚集体和其他非外泌体微囊泡可能通过超速离心干扰较终分离的外泌体产物。DGUC有助于克服超速离心的局限性,并提供较纯净的外泌体。DGUC在精细化和高性能外泌体分离方法中的应用。简而言之,在分离细胞碎片后,应用1×105g用60%碘沙醇离心3小时,然后用1×10离心5用40%碘沙醇g18小时有助于形成多达12个碘沙醇梯度级分和两个外泌体级分。超速离心使用连续的密度梯度或逐步梯度来较小化这些颗粒材料对外泌体的干扰。外泌体与细胞死亡形式相关,可以参与凋亡和坏死细胞的清理和处理过程。福州尿液外泌体分离供货商
外泌体分离的方法会影响外泌体样品的质量和数量。济南细胞外泌体分离报价表
外泌体的物理表征方法:常用的外泌体物理表征方法是基于显微镜的方法,例如透射电子显微镜、扫描电子显微镜、低温电子显微镜和原子力显微镜;动态光散射;纳米粒子跟踪分析;可调电阻脉冲传感;和单个EV分析等。用于分析外泌体浓度、定量和概况的分子生物方法主要包括:实时定量PCR、数字PCR技术(基于芯片的dPCR、液滴数字PCR、ddPCR)、蛋白质免疫印迹、全基因组测序(next-generationsequencing)、exome-targetedsequencing(下一代测序)、微阵列图谱技术和ELISA技术等。济南细胞外泌体分离报价表