大多数商业zhiliao性抗体属于IgG类，在Fc结构域中含有N-聚糖。一个重要的关键质量属性是糖基化曲线，因为它会影响稳定性、溶解度、药效学和药代动力学特性。这种翻译后修饰可能发生在生物工艺开发和制造过程中，因此需要密切监测。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶已成为一种被接受的快速表征单克隆抗体（mAb）的分析工具。FabRICATOR在铰链下方消化IgG，产生F（ab'）2和Fc/2片段。单个FabRICATOR消解位点和质量谱的后续精度使Fc糖基化谱能够检测，从而可以监测批次间的一致性和其他关键质量属性。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶将ADC（基于 IgG）消化成其亚基，用于表征这类复杂的药物。北京FabRICATOR ZIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
大多数zhiliao抗体携带人 IgG1 骨架，双特异性或多特异性形式的开发正在迅速增加。此类抗体的分析需要特异性酶来表征特性，例如单价结合、二硫键扰乱和配对 Fc 糖基化。传统方案包括使用木瓜蛋白酶和 Lys-C 的酶消化，这需要优化以大限度地减少过度消化并获得足够的产量。Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE） 在铰链上方的一个特定位点消化人 IgG1，以产生完整的 Fab 和 Fc 片段。该酶在大多数人IgG1 上也具有活性，其中铰链区域以下的突变已被引入。为了证明FabALACTICA的性能，我们消化了不同的人IgG1抗体，并使用RP-HPLC分析了所得片段。用FabALACTICA消化后观察到的定义峰显示了不同人IgG1抗体的均质片段生成和强大的酶性能。FabALACTICA 酶也可用于生成完整的 Fc 片段。北京GlycINATORIdeS蛋白酶抗体酶切Genovis的GlySERIAS 是一种独特的酶。
与肽图谱相比，根据Genovis科学家的经验，尤其是对于像抗体这样的分子，许多人在常规实验中做了太多的肽图谱，而中级水平（Middle-level）的方法可以很好地工作。中级方法（IdeS酶切抗体）需要更少的实际操作步骤和较少的示例处理，所有这些都意味着过程中出错的事情更少。我们的许多酶可以作为平台方法，同样的方法适用于绝大多数的抗体，这不是肽图的情况下，可能需要优化整个样品制备，LC分离，质谱设置和数据分析的每个不同的抗体分析。这些变化可能是很小的，但没有一种适用于所有肽图的方法。由于分析和数据分析的简单性，中级方法非常适合自动化和高通量的工作流程。肽图当然可以自动用于样品制备，但高通量肽图生成大量数据，仍然需要彻底分析。事实上，肽图谱是一个多步骤的过程，每一个步骤都可能破坏方法，并可能导致破坏蛋白质的人工制品，很难交叉训练给非专业人员。中级水平的方法很容易交叉训练，我们的方法在质量控制实验室中被成功地使用。肽图谱是一种用于修饰分析和氨基酸确认的方法，但一旦完成了这一工作，我相信使用中级分析可以成功地更有效地完成抗体样本的大部分工作。
与IdeS不同，为了获得更均匀的度拉糖肽融合蛋白的消化产物，用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白质消化该蛋白质，该蛋白由与琼脂糖珠共价偶联的GlySERIAS酶组成。通过将酶偶联到树脂上，可以增加酶与蛋白质的比率，从而可以进一步加速反应，以获得更完整的连接子消化。此外，该酶不会存在于样品制备中，可能会干扰样品分析。为了进行比较，度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化过夜，或用GlySERIAS冻干1小时并在37°C下过夜消化。 为了降低样品复杂性，使用内切糖苷酶GlycINATOR冻干去除Fc聚糖，并减少链间二硫键。通过反相LC-MS对样品的分析表明，GlySERIAS Immobilized几乎完全消化了Fc结构域中的连接子，留下了接近均质的Fc/2产物，其中含有来自连接子的一个丝氨酸残基。用 GlySERIAS 冻干 1 小时或过夜消化，两者都会产生几种 Fc 产物，并附着不同数量的丝氨酸和甘氨酸残基。GLP-1肽在所有三个样品中以两种变体存在。使用GlySERIAS固定化消化的均质Fc/2能够详细研究特定于Fc区域的质量属性。此外，在样品中未观察到干扰分析的酶峰。作为补充，Fc/2 产物在用 GlySERIAS 冻干消化后残留部分连接子，有助于研究位于 GS 连接子的修饰。这就是为什么Fc/2和GLP-1肽都被检测为几种变体。
Genovis的FabRICATOR是一种半胱氨酸蛋白酶，它对许多不同的物种和IgG亚类都有活性，包括人IgG亚类1-4以及猴子、兔子、大鼠和绵羊IgG的一些亚类。FabRICATOR在铰链下方的单个位点进行消化，生成F(ab’)2和Fc/2子基，可以进一步还原生成Fd’，轻链和F/2子基是必需的。FabRICATOR（IdeS）通过蛋白-蛋白相互作用与目标抗体工作，这说明了它的高特异性。事实上，它在单个位点消化意味着使用FabRICATOR时没有过度消化的风险，其高特异性也意味着相同的消化方案可以作为平台方法应用于许多不同的抗体。FabRICATOR（IdeS）不需要还原条件来获得良好活性，也不需要任何额外的辅助因子，它将在不同生理缓冲中发挥作用。这意味着按照下面的铰链消解，您将生成F(ab’)2和Fc/2片段用于分析或其他应用。zhiliao性抗体和基于IgG的生物制药的结构表征和监测关键质量属性。重庆GlycINATORIdeS蛋白酶
Genovis的GingisREX （RgpB） 是一种精氨酸特异性蛋白酶。北京FabRICATOR ZIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
与IdeS不同，Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一种IgA1特异性酶，可在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1，而IgASAPSub1+2特异性消化铰链上方的IgA1和IgA2m1。两种酶都产生完整且均质的Fab和Fc片段。IgASAP酶能够生成完整的单价Fab片段以及IgA的中级分析，从而促进IgA的表征，例如，在疫苗、zhiliao和诊断的开发过程中。独特的酶促工具，可实现IgA的中级表征和质量控制；生成均相的Fab和Fc片段，并保留免疫反应性；高度特异性–人IgA铰链上方的一个消化位点。北京FabRICATOR ZIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
Genovis除了提供IdeS酶以外，还提供很多种特异性蛋白酶，如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTI...
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