陕西FabALACTICAIdeS蛋白酶

Blinatumomab（一种对 CD19 和 T 细胞标志物 CD3 具有特异性的 BiTE 分子）的研究级生物仿制药在室温下用固定化过夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通过LC-MS对消解样品的直接分析表明，所有三个连接子区域均被消解，α-CD3 VL和VH链洗脱为一个色谱峰，α-CD19 VH和VL链作为单独的峰洗脱。来自连接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 结构域的小峰显示该短连接子未完全消化，表明 GlySERIAS 对短连接子的活性较低。与完整的蛋白质分析相比，四个结构域的分离提供了具有单同位素分辨率的高质量光谱。可以观察到每个结构域的几个不同变体，剩余的连接子残基数量不同。在色谱分离过程中，α-CD3 VH结构域无法从α-CD19 VH结构域完全基线分离，导致在相关质谱中观察到一些共洗脱。四个结构域的分离产生了有关在完整蛋白质水平上鉴定的蛋白质修饰位置的信息。例如，在完整水平上鉴定的 37 Da 的蛋白质修饰被分配给 α-CD3 VH 链。此外，240Da 和 320da 的两个修饰分别被分配给 α-CD3 VL 结构域。后者还含有一个带有五六个组氨酸残基的 His 标签。这些数据证明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 对包含多个柔性连接子蛋白进行质量控制的中级工作流程的强大功能。用于生物药研究，如Fc聚糖分析、双特异性抗体、亲和力和亲和力效应和鉴定翻译后修饰等。陕西FabALACTICAIdeS蛋白酶

抗体的氧化是可能影响抗体功能的关键质量属性，需要密切定量和表征。它可能导致mAb的体内半衰期、功效和稳定性降低。Genovis的FabRICATOR（IdeS）消化产生的抗体亚基是研究抗体氧化的理想选择。酶解的稳健性允许在受监管的环境中监测抗体亚基氧化。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶，可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体，产生均质的F（ab'）2和Fc片段。该酶用于基于抗体的疗法（如mAb、ADC、生物类似药和Fc融合蛋白）的表征、质量控制、稳定性测试、生产监测和克隆选择。高度特异性-铰链下方的一个消化位点快速–在30分钟内生成均匀的片段池实现基于抗体的生物zhiliao药物的表征和质量控制可固定在即用型离心柱中广东FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切生成完整的 Fab片段或从依那西普上的融合TNFR结构域中分离 Fc。

与IdeS不同，Romiplostim 由四个相同的血小板生成素 （TPO） 受体结合肽和一个 Fc 片段组成，通过柔性聚甘氨酸序列连接在一起。与度拉糖肽类似，用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下过夜，或用 GlySERIAS 冻干 1 小时并在 37°C 下过夜消化该蛋白质。 链间二硫键被还原，以便于通过反相LC-MS进行以下分析。与度拉糖肽的观察结果类似，用固定化酶消化产生均质的 Fc/2，剩下一个连接子残基，此处为甘氨酸残基。这有助于识别专门位于Fc区域的修改。用冻干酶消化 1 小时得到 Fc/2，剩余 4 个甘氨酸残基和少量的 Fc/2 仍与一个 TPO 肽连接。另一方面，这使得研究 Fc/2 和第yi个肽之间的连接区域成为可能，而不会受到第二个肽的干扰。用 GlySERIAS 冻干液过夜消化产生 2 个 Fc/2 变体，分别剩下 4 个和 1 个甘氨酸残基。根据消化时间的不同，使用冻干产物释放的肽以五或七种变体存在，接头中残留的甘氨酸残基数量不同，而使用固定化产物释放的肽以四种变体存在。

LC-MS中级分析是一种被大众接受的分析方法，用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制药。它有助于理解多种关键质量属性 （CQA），例如糖基化、氧化和 C 端赖氨酸剪切。这种关于翻译后修饰（PTM）的详细知识是生物制药开发和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色谱柱，可快速进行单克隆抗体的柱上酶切，并产生一致的亚基。该色谱柱含有固定化的FabRICATOR（IdeS）酶，可在铰链下方快速且特异性地消化IgG，产生F（ab'）2和Fc片段，而不会出现任何过度消化的风险。为了减少样品处理并为样品制备提供自动化解决方案，FabRICATOR被共价固定在树脂上，并装在适用于HPLC的PEEK色谱柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色谱柱，只需稍作修改，即可使用标准HPLC-MS装置自动生成抗体亚基。然后，FabRICATOR HPLC色谱柱上消解产生的亚基被捕获在在线连接的反相（RP）色谱柱的柱头上。Genovis提供FabRICATOR Fab2试剂盒，这是IgG片段生成和纯化的强大工具。

经过多年的经验积累及市场积淀，倍笃生物已组合多条不同产品线，分别满足体外诊断、organoid及干细胞、细胞基因药物等领域的需求。其中，细胞基因药物领域产品线包含SAN HQ高盐核酸酶及M-SAN HQ中盐核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP级MSC/PSC培养基、GMP级胶原酶、AAV滴度检测产品、工艺杂质及外源污染物残留检测产品、聚糖分析用酶、ADC偶联技术、QED抗体对、AAV中和抗体、蛋白酶等；相关品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德国BASF、德国Sartorius、德国Nordmark、瑞典Genovis、美国QED、中国君研生物等。FabRICATOR（IdeS）不需要还原条件来获得比较好的活性。重庆FabDELLOIdeS蛋白酶抗体酶切

Genovis的GingisKHAN 可以消化单克隆人 IgG1 抗体和 Fc 融合蛋白。陕西FabALACTICAIdeS蛋白酶

用于IgA1和IgA2m1以上铰链消化的冻干酶。与IdeS不同，Genovis提供的IgASAPSub1+2在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1和IgA2m1，产生完整且均匀的Fab和Fc片段。由于人IgA1的铰链比IgA2的铰链长，因此IgA1和IgA2m1之间来自消化位点的氨基酸C末端不同。IgASAPSub1+2可消化分泌物和血清IgA。孵育时间为过夜（16-18小时），并且由于酶的特异性，没有过度消化的风险。该酶在pH值为6.0至8.0时具有活性，不需要还原条件或辅助因子即可产生活性。活性为37°C。IgASAPSub1+2是从丹毒梭菌克隆而来的，并在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签，分子量为131kDa。IgASAPSub1+2冻干剂以冻干粉的形式提供，装在1000个单位的小瓶中，用于消化1mgIgA1和IgA2m1。陕西FabALACTICAIdeS蛋白酶