Genovis提供色谱柱形式的FabRICATOR(IdeS)酶,是在铰链下方对IgG进行柱上消化的固定化酶。Genovis的FabRICATOR(IdeS)是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶,可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体,产生均质的F(ab')2和Fc片段。酶解后,可以使用反相HPLC、质谱或其他分析方法分析片段。抗体消化和亚基生成的自动化使生物反应器的在线监测应用成为可能,例如,作为2D-LC-MS设置的一部分,将反应器直接耦合到MS。这种自动化的抗体亚基分析方法减少了操作人员的时间、样品处理时间并提高了通量。单一酶切位点和质谱的精度确保了Fc糖基化谱检测,用于监测批次间的一致性和其他关键质量属性。福建GlycINATORIdeS蛋白酶抗体酶切

与IdeS不同,度拉糖肽由两个胰高xue糖素样肽-1 (GLP-1) 分子组成,它们通过柔性 GS 接头连接到人 IgG4 的 Fc 区域。为了分别研究肽和 Fc 区域,从而鉴定结构域特异性 PTM,用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下冻干消化度拉糖肽 1 小时。为了降低样品复杂性,使用内切糖苷酶GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖,并用DTT还原链间二硫键。反相LC-MS对样品的分析表明,使用GlySERIAS进行连接子消化后,肽从Fc区域完全去除。连接子中的大量甘氨酸残基为GlySERIAS提供了许多不同的潜在消化位点,这就是为什么Fc/2和GLP-1肽都被检测为几种变体,其中不同数量的甘氨酸和丝氨酸残基仍然连接。此外,还鉴定了GLP-1肽的氧化。尽管GlySERIAS同时在多个位点进行消化,但一式三份的酶解在获得的不同Fc/2变体的相对量中显示出可重复的结果。湖北GingisKHANIdeS蛋白酶抗体酶切FabRICATOR 验证试剂盒应用:简化QC方法验证;批次间变异性评估的理想形式;提高批量放行检测性能的可信度。

Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶 可用于 IgG 的所有人类亚类以及人源化和嵌合 IgG。该酶对其他物种的 IgG 也有活性,包括来自大鼠、猴子、兔子和绵羊的某些类别的 IgG。因此,FabRICATOR的高特异性在某些情况下会使其对铰链区域的突变敏感,并损害酶活性。来自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成,与 FabRICATOR 相比,FabRICATOR Z 在消化这些 IgG 方面具有更高的效率。然而,小鼠 IgG1 在铰链下方具有不同的序列,并且不被 FabRICATOR Z 消化。对于这种抗体种类,FabULOUS 和 FabULOUS Fab 试剂盒可用于制备 Fab 片段。
Blinatumomab(一种对 CD19 和 T 细胞标志物 CD3 具有特异性的 BiTE 分子)的研究级生物仿制药在室温下用固定化过夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通过LC-MS对消解样品的直接分析表明,所有三个连接子区域均被消解,α-CD3 VL和VH链洗脱为一个色谱峰,α-CD19 VH和VL链作为单独的峰洗脱。来自连接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 结构域的小峰显示该短连接子未完全消化,表明 GlySERIAS 对短连接子的活性较低。与完整的蛋白质分析相比,四个结构域的分离提供了具有单同位素分辨率的高质量光谱。可以观察到每个结构域的几个不同变体,剩余的连接子残基数量不同。在色谱分离过程中,α-CD3 VH结构域无法从α-CD19 VH结构域完全基线分离,导致在相关质谱中观察到一些共洗脱。四个结构域的分离产生了有关在完整蛋白质水平上鉴定的蛋白质修饰位置的信息。例如,在完整水平上鉴定的 37 Da 的蛋白质修饰被分配给 α-CD3 VH 链。此外,240Da 和 320da 的两个修饰分别被分配给 α-CD3 VL 结构域。后者还含有一个带有五六个组氨酸残基的 His 标签。这些数据证明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 对包含多个柔性连接子蛋白进行质量控制的中级工作流程的强大功能。半胱氨酸蛋白酶,可在来自多个不同物种和亚类的 IgG 的铰链区域消化,产生 Fab 和 Fc 片段。

与IdeS不同,Genovis的GlySERIAS是一种独特的酶,可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白连接子,例如Gly4Ser和GlyxSery(GS)以及聚甘氨酸(G)接头。该酶能够分离多功能融合蛋白的各个结构域,以促进表征并增加对这些分子的理解。融合蛋白的中级分析既可以降低整体样品的复杂性,又可以对翻译后修饰进行结构域特异性鉴定和监测。为了改善连接子的去除,Genovis建议使用GlySERIASImmobilized。对于连接子表征,我们推荐GlySERIAS冻干。具有柔性接头的独特酶消化融合蛋白;中级方法可降低融合蛋白表征的复杂性;复杂融合蛋白的可靠且可重复的消化。Genovis的GlySERIAS酶切由甘氨酸或甘氨酸和丝氨酸残基的重复序列组成的柔性连接子。该酶在天然反应条件下具有活性,能够对复杂的融合蛋白进行中级表征。连接子区域同时在多个位点被消化,导致先前连接的组分分离。活性发生在pH7.6下,孵育时间可以根据所需的产物而变化。GlySERIAS是从噬菌体K克隆而来的,在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为18kDa。Genovis的FabRICATOR (IdeS) 酶已成为一种接受的快速表征单克隆抗体 (mAb) 的分析工具。河北GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白组学
用Genovis的GlySERIAS 消化,所有三个连接子区域均被消解。福建GlycINATORIdeS蛋白酶抗体酶切
其他基于 IgG 的生物制药需要仔细表征和监测关键质量属性,例如氧化、糖基化和其他翻译后修饰。与抗体的克隆选择、工艺开发和稳定性研究相关的大量样品通常通过液相色谱质谱 (LC-MS) 进行分析。然而,在LC-MS之前进行足够规模的样品制备通常具有挑战性。为了解决样品制备的挑战,Genovis将半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR(IdeS)固定在磁性琼脂糖珠上,现在称为FabRICATOR MagIC。FabRICATOR固定在磁珠上,可同时快速自动消化多种抗体,促进中级表征工作流程。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以较少的用户交互减少实验和操作时间,降低样品处理错误的风险,同时提高通量。福建GlycINATORIdeS蛋白酶抗体酶切
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