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PNGaseF去糖基化酶基本参数
  • 品牌
  • Genovis
  • 型号
  • L1-F02-025
PNGaseF去糖基化酶企业商机

在Genovis的PNGaseF去除N-聚糖并用SialEXO和GalactEXO截断O-聚糖后,在质谱图中观察到几个与GalNAcs相关的峰。为了去除剩余的GalNAc残基,应用GalNAcEXO酶。用GalNAcEXO处理后观察到的单个蛋白峰显示完全去除剩余的GalNAcs。 GalNAcEXO在生理缓冲液和中性pH值中具有活性,使其与大多数样品相容。此外,GalNAcEXO的活性不依赖于任何可能影响LC-MS分析的辅因子,如BSA。根据底物的性质,糖蛋白的GalNAcEXO反应在2小时内完成,而更复杂的样品可能需要孵育过夜。Genovis的GalNAcEXO也可固定在离心柱中,以便快速方便地处理样品,在制备过程中不会残留酶。实现高通量 N-糖去除,简化糖蛋白底物的下游分析。山西PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

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Genovis的FucosEXO 是 α-岩藻糖苷酶的混合物,用于有效水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游离寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4-连接岩藻糖残基。它是 N-和 O-糖蛋白的聚糖结构分析以及寡糖的外切糖苷酶阵列的宝贵工具。1. 高效α-岩藻糖苷酶混合物 – 快速去除 α1-2、α1-3 和 α1-4-连接的岩藻糖;2. 可靠的酶解增加了对外切糖苷酶阵列的信心;3. 可固定在即用型离心柱中。用于糖蛋白去氟糖基化的冻干酶。Genovis的FucosEXO冻干剂以冻干粉的形式提供,装在2000单位的小瓶中,用于2mg糖蛋白的去碳基化。辽宁PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究对游离的N-聚糖的分析表明,SialEXO在溶液中完全脱唾液酸化。

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Genovis的SialEXO产品是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶。这些酶对天然糖蛋白或游离的聚糖结构上存在的 N- 和 O-连接聚糖均具有活性。SialEXO用于在用OpeRATOR或OglyZOR消化之前预处理O-糖基化蛋白。其他应用包括降低样品复杂性、电荷异构体分析和外切糖苷酶阵列。N-连接、O-连接和游离聚糖的高效去唾液酸化快速去除唾液酸,增强对蛋白质电荷变体的分析可固定在即用型离心柱中。然后可以用FabRICATOR消化所得的去糖基化蛋白,并通过中级质谱分析。我们将该工作流程应用于依那西普的分析,虽然未经处理的TNFR结构域过于复杂而无法分析,但O-聚糖组成可以在用PNGase F处理后进行分离和比较。

生成携带 O-糖的糖肽,该酶可实现 O-糖谱分析、O-糖肽图谱和位点占用测定,以及使用 MS 分析的中级方法。1.可靠O-聚糖特异性蛋白酶 – 消化丝氨酸/苏氨酸糖基化位点的 N 末端;2.稳健的消化,增强复杂生物制药的表征;3.高特异性 - 可靠的聚糖位点测定和定位。Genovis的OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶,可消化携带he心1 O-聚糖的蛋白质,糖基化(he心 1)Ser 和 Thr 残基的 N 端。OpeRATOR 来源于 Akkermansia muciniphila,并以 E 表达。大肠杆菌。该酶含有 His 标签,分子量为 42 kDa。SialEXO 来源于 Akkermansia muciniphila,并以 E 表达。大肠杆菌。SialEXO Lyophilized 中的酶也含有 His 标签,这些组分的分子量分别为 43 kDa 和 66 kDa。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽的冻干酶。Genovis的OpeRATOR 冻干剂以冻干粉末的形式提供,装在 2000 个单位的小瓶中,用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。用SialEXO对依那西普糖蛋白去唾液酸化,并用ProteinSimple成像等电聚焦分析。

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为了证明Genovis的PNGase F冻干和PNGase F固定在各种底物上的去糖基化能力,用PNGase F冻干或PNGase F固定化处理了一系列糖蛋白。使用天然反应条件在一小时内有效去除曲妥珠单抗和依那西普上的所有N-糖,以及西妥昔单抗上的Fc-糖。当加入RapiGest™并在变性条件下进行反应时,西妥昔单抗的所有N-聚糖(包括Fab-聚糖)在PNGase F固定化10分钟内完全去除,PNGase F固定化15分钟内完全去除。在变性反应条件下,PNGase F 在 30 分钟内成功将更复杂的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用变性和还原反应条件,将常用的糖蛋白标准品RNase B在10或15分钟内完全去糖基化,分别使用PNGase F冻干或PNGase F固定化。在天然和变性条件下生成的去糖基化样品与LC-MS分析兼容。并且该酶还在 α1-3 连接的末端 GalNAcs 上显示出活性。重庆瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

O-糖基化生物制药(如依那西普)表征:PNGase F、OglyZOR。山西PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

用于离心柱中糖蛋白去胶基化的固定化酶。Genovis的FucosEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的FucosEXO酶,用于糖蛋白的去氟糖基化,而不会用酶污染z终制剂。Microspin 色谱柱可用于 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去胶基化。1. 易于使用的离心柱;2. 提高酶与底物的比例,提高消化效率;3. z终样品中不含酶。有效去除α1-2,3,4连接岩藻糖:分析用复杂聚糖结构修饰的糖蛋白可能具有挑战性,需要高效和特异性的酶学工具。Genovis的FucosEXO 是 α-岩藻糖苷酶的混合物,用于有效水解 N-和 O-糖蛋白或寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4 连接的岩藻糖残基,无需辅助因子或添加山西PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

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