Fc N-聚糖在抗体的效应功能中起着至关重要的作用，但可能会增加蛋白质表征测定的复杂性。在天然条件下用PNGase F去除Fc N-糖可以表征游离N-糖以及去糖基化抗体的功能和结构。 为了证明PNGase F固定化和PNGase F冻干在天然反应条件下有效去除Fc N-聚糖，对zhiliao性抗体曲妥珠单抗进行了处理。图2中的质量数偏移表明，在37°C下用Genovis的PNGase F冻干或PNGase F固定化孵育1小时后，曲妥珠单抗上的Fc N-聚糖成功去除，与在溶液中用PNGase F冻干处理的样品相比，没有酶干扰用PNGase F固定处理的样品的分析。OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物，可快速有效地去除抗体；陕西高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
我们展示了使用两种蛋白作为底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一种 Fc 融合蛋白，含有 TNFα 受体的胞外结构域。该结构域用 2 个 N-糖和 8-11 个 1 个具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修饰。在 37°C 下将这种重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时，可完全去除所有 N-和 O-糖，如中级 LC-MS 分析所示。促红xibao生成素 （EPO） 是一种携带 3 个 N-聚糖和 1 个he心 1 个 O-聚糖的小蛋白质，其总质量的近 40% 由聚糖组成。O-连接聚糖通常存在于蛋白质的暴露位置，因为它们在蛋白质折叠发生后附着。只有负责其合成的糖基转移酶才能接触到这些暴露的位点。河北瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶GalactEXO混合物由两种半乳糖苷酶组成，可高效水解 β1-3 和 β1-4 连接的半乳糖酶。
为了证明Genovis的PNGase F冻干和PNGase F固定在各种底物上的去糖基化能力，用PNGase F冻干或PNGase F固定化处理了一系列糖蛋白。使用天然反应条件在一小时内有效去除曲妥珠单抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔单抗上的Fc-糖。当加入RapiGest™并在变性条件下进行反应时，西妥昔单抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分钟内完全去除，PNGase F固定化15分钟内完全去除。在变性反应条件下，PNGase F 在 30 分钟内成功将更复杂的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用变性和还原反应条件，将常用的糖蛋白标准品RNase B在10或15分钟内完全去糖基化，分别使用PNGase F冻干或PNGase F固定化。在天然和变性条件下生成的去糖基化样品与LC-MS分析兼容。
我们测量了FucosEXO从一组dai表不同键的不同寡糖底物中释放的岩藻糖。FucosEXO可有效释放α1-2、α1-3和α1-4连接的岩藻糖，对α1-6连接的岩藻糖残基没有活Genovis的FucosEXO的底物特异性：岩藻糖以不同的键存在于N-和O-聚糖上。α1-2、α1-3 和 α1-4 连接的岩藻糖常见于 O-聚糖中，并作为 N-聚糖的天线岩藻糖基化，而 α1-6 连接的岩藻糖被发现是 N-聚糖he心的修饰。β1-3,4半乳糖的水解：Genovis的GalactEXO 是一种β-半乳糖苷酶混合物，可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-连接末端半乳糖。GalactEXO中的酶来源于Akkermansia muciniphila，并在大肠杆菌中表达。
该酶适用于在释放的聚糖结构上修剪半乳糖，用于外切糖苷酶阵列，或用于生成具有均相 G0/G0F 聚糖谱的抗体。1. 高效β-半乳糖苷酶混合物 – 快速去除末端 β1-3 和 β1-4-连接的半乳糖；2. 有助于在亚基水平上识别糖基化修饰；3. 可固定在即用型离心柱中。Genovis的GalactEXO是一种外切糖苷酶，含有β-半乳糖苷酶的混合物，可有效去除N-和O-糖基化蛋白或寡糖上的半乳糖残基。该混合物由两种半乳糖苷酶组成，可高效水解 β1-3 和 β1-4 连接的半乳糖酶。GalactEXO在天然条件下水解糖蛋白，并在5.5至7.5的宽pH值范围内显示活性。用SialEXO对依那西普糖蛋白去唾液酸化，并用ProteinSimple成像等电聚焦分析。河北瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶
上海倍笃生物科技有限公司（简称“倍笃生物”）代理Genovis的IdeS酶等。陕西高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
在这里，Genovis分析了 C1 抑制剂——一种人血浆衍生的生物zhiliao药物，由 6 种 N-聚糖和多达 28 种 O-聚糖修饰，主要由唾液酸he心 1 结构组成。在不对这种高度异质的蛋白质进行任何预处理的情况下，反相LC-MS分析产生了无法详细解释的复杂质谱图。在天然条件下使用OmniGLYZOR Microspin色谱柱，可在3小时内有效去除所有O-聚糖。然而，蛋白质上仍残留着 1 到 3 个 N-聚糖。使用冻干的PNGase F和OmniGLYZOR试剂盒中包含的MS友好型RapiGest™ SF表面活性剂*，在变性条件下通过额外的去糖基化步骤去除这些不可接近的N-聚糖。观察到所有聚糖的完全去除，但分子上存在的少量he心 2 O-聚糖除外。水解O-聚糖的酶不会从变性中获益，这就是为什么OmniGLYZOR Microspin色谱柱只能在非变性条件下使用的原因。陕西高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
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