本发明涉及一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。背景技术：近年来，随着荧光PCR技术的不断成熟。该技术在科研及检验领域得到了应用，成为分子生物学领域不可或缺的一项重要技术。在进行遗传背景分析过程中，血液、唾液和口腔拭子成为重要的生物分析样本。但是，由于血液、唾液和口腔拭子中存在有很多PCR反应物，例如血液中含有血红素，蛋白质，脂肪，抗凝剂等，唾液和口腔拭子含有蛋白质，脂肪，抗凝剂等，使得用血液、唾液和口腔拭子直接进行荧光PCR反应变得尤为困难。因此，现在临床上往往先要从血液、唾液和口腔拭子样本中纯化出DNA，才能进行样本的DNA扩增。提取血液、唾液和口腔拭子基因组的方法种类非常多，传统酚氯仿抽提法，高盐盐析法，模离心柱吸附法，磁珠法，等等。经典的血液核酸提取方法包括几个过程。1.通过低渗液涨破红细胞，将血红素物质释放出来，然后离心，清洗去除血红素。2.通过裂解液裂解白细胞，释放核酸物质。3.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质，去除其他杂质。4.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。5.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。 口腔拭子如果在使用的过程中出现过敏现象，请立即停止使用，严重时请及时就医。广东可定制口腔拭子供应商家
口腔拭子DNA提取介绍所述iCleanhcy的DNA口腔细胞的试剂盒允许从人口腔拭子的基因组DNA的快速和有效的纯化。
DNA样本准备裂解液后，您可以在使用iCleanhcy不到15分钟纯化DNA技术。根据所使用的DNA纯化试剂盒，可以使用液体处理机器人单独或在自动化系统中处理样品。对于套件预期用途的iCleanhcy设计DNA口腔细胞试剂盒以允许从人颊细胞拭子或来自漱口水/或者唾液采集器手机人体唾液的沉淀细胞中分离以下量的基因组DNA。在加工前，样品可以在4°C下储存长达2周，而DNA产量或质量没有明显损失，不会降解。纯化的基因组DNA适用于下游应用，例如PCR,芯片.iCleanhcy?的DNA归口腔细胞培养基：在150微升的总体积在1-3毫微克/微升的浓度制作的基因组DNA的归一化产率。
iCleanhcy的DNA口腔细胞培养基：纯化的基因组DNA的6微克。重要提示：DNA产量各不相同，取决于几个因素，包括服用拭子的人的技术，供体是高还是低的脱落剂，以及使用的拭子类型。优点使用iCleanhcy的DNA口腔细胞的试剂盒，分离基因组DNA提供了以下优点：使用基于磁珠的技术分离基因组DNA，无需使用危险化学品，离心或真空歧管在样品制备和裂解后不到15分钟内。 辽宁咽拭子口腔拭子生产产家这款口腔拭子主要用于提取采集人体口腔黏膜DNA用的，采集和释放都比较好。
所有反应孔背景信号好、Ct值都在19～25之间，荧光扩增曲线呈典型的S型，说明本发明实例1提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法具有较好的可行性。将四份不同来源不同的人血液样本进行荧光PCR扩增检测，每份样本平行三次，结果分别如图2、图3、图4、图5所示，由图可见，每个样本的平行实验，其曲线的Ct值很接近且≤25。说明本发明实例提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法有可靠的重复性以及较好的均一性。实施例2与市场现有的血液基因组提取试剂盒产品对比。本发明的具体步骤如下：将**管颠倒混匀后，吸取100μL血液至，加入200μL的核酸释放剂（20mM～80mM的氢氧化钠溶液、～、～、～、～***钠、～3%甲酰胺），涡旋混匀，然后5000g离心30s，弃上清，获得细胞沉淀；然后再加入200μL核酸释放剂，涡旋1min至沉淀完全散开，5000g离心30s，弃上清；向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂，涡旋振荡1min，室温放置5min，12000g离心30s，取上清液即为提取的血液基因组DNA；取上清液3μL，加入到配制好的荧光PCR反应液，于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。选用某公司的血液基因组提取试剂盒作为方法比对，具体操作过程：将取血管颠倒混匀数次，吸取200μL血液于。
本发明的特征在于：应用本发明的血液基因组DNA提取方法在10分钟内提取血液基因组可用于荧光PCR扩增检测，主要步骤如下。（1）将**管颠倒混匀后，吸取100μL血液或者吸取100μL口腔拭子样本保存液至，加入200μL的核酸释放剂，涡旋混匀，然后5000g离心30s，弃上清，获得细胞沉淀。（2）将步骤（1）中得到的血液细胞沉淀中再加入200μL核酸释放剂，涡旋振荡1min，至沉淀完全散开，然后5000g离心30s，弃上清。（口腔拭子样本则无需进行此步骤）。（3）向步骤（2）所获得的沉淀中加入50μL核酸释放剂，涡旋振荡1～2min；室温放置5min，12000g离心30s，取上清液即为提取的基因组DNA；所述的核酸释放剂组成为20mM～80mM的氢氧化钠溶液、～、～、～、～***钠、～3%甲酰胺；所述荧光PCR反应液组成为ROX、TaqMan探针、引物、dNTP、dUTP、UDG、BSA、聚合酶及缓冲液。附图说明图1为实例1检测的8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。图2～图5为实施例1提供的四份血液样本的三次平行实验的荧光扩增曲线图。图6为实施例2对比实例1提供的对8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。具体实施方式为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案。口腔拭子的优点是将产品进行环氧乙烷灭菌。
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口腔拭子的采样头端的凹陷处折断力大小应该不小于2N。广东可定制口腔拭子供应商家
基因采样套装用途：基因检测，分子诊断，DNA采集，细胞学，基因检测采样，**基因，遗传学，公安DNA系统基因身份证，基因密码，疾病筛查分析研...查看全文全外显子基因突变检测采样盒全外显子基因突变检测采样盒，是贝瑞和康推出的一款便携式口腔脱落细胞采样盒，用于与乳腺AI、卵巢AI等发生密切相关的BRCA1/2基因突变检测的前期取样过程。该采样盒内置两套口腔拭子，口腔拭子采用自封袋单独包
检测口腔拭子采样流程指南口腔拭子采样方法(口腔脱落细胞)取样是简单、无痛、无创的DNA标本采集方法。
该方法适用于采集任何年龄段人群的DNA样本。 广东可定制口腔拭子供应商家
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