据差异表达基因在样本中标准化后的表达值，计算皮尔森相关，再利用系统聚类法（Hierarchical Cluster），终得到样品的整体聚类结果。在图中，表达量的变化用颜色的变化表示，蓝色表示表达量较低，红色表示表达量较高。
问：差异基因筛选条件能设的阈值是多少？很多客户希望通过调整差异基因筛选阈值来找相关基因是否有必要？？
答：一般来说，等级较高的文章阈值的设置会比较严格；而在某些文章中，差异基因筛选阈值会适当放宽：如在一些无生物学重复的文章中，只将qvalue作为差异基因筛选标准，不考虑log2foldchange；有的文章则将pvalue作为差异基因的筛选标准。 上海融享专注转录组测序。天津真核有参转录组测序公司哪家好
1 转录组与基因组的区别
以DNA为模板合成RNA的转录过程是基因表达的第一步，也是基因表达调控的关键环节。因此,转录组通过转录过程来源于基因组，但与基因组相比较，信息量相对较小，原因是*有很少的基因组DNA被转录。如人类基因组包含有30亿个碱基对，其中大约只有3万~4万个基因转录成mRNA分子，只占总长度的1.5%。个体的基因组是相对稳定的，但其转录组却包含了时间和空间上的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下,其基因转录表达情况是不完全相同的。例如,幼年的神经干细胞和成熟分化的神经元，其基因表达谱的不同。同一个体的不同细胞基因表达谱也不一样，即通过转录表达谱区别于其他组织，如脑组织和血管组织等都具有各自特异的基因表达谱而显示出组织的特异性。同样的，我们的机体在正常与疾病状态下，转录组表达谱也会发生比较大的变化，通过正常对照与疾病组的转录组学比较，就可以筛选出差异基因表达谱，用于疾病的早期诊断、用药效果及愈后评估。 广东LncRNA转录组测序机构电话上海全转录组测序找上海融享生物科技有限公司价格更低 服务更好。
生物学重复是任何生物学实验所必须的，高通量测序技术也不例外。生物学重复主要有两个用途：一个是证明所涉及的生物学实验操作是可以重复的且变异不大，另一个是为了确保后续的差异基因分析得到更可靠的结果。样品间基因表达水平相关性是检验实验可靠性和样本选择是否合理的重要指标。相关系数越接近1，表明样品之间表达模式的相似度越高。Encode计划建议皮尔逊相关系数的平方(R2)大于0.92(理想的取样和实验条件下)。具体的项目操作中，我们要求生物学重复样品间R2至少要大于0.8，否则需要对样品做出合适的解释，或者重新进行实验。根据各样本所有基因的表达值：RPKM，计算组内及组间样本的相关性系数，绘制成热图，可直观显示组间样本差异及组内样本重复情况。样本间相关性系数越高，其表达模式越为接近
如果研究的物种有相关GO注释数据库，直接该数据库进行GO的分析；如果没有，可以利用注释工具，得到每个基因对应的GO条目。
EGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，京都基因与基因组百科全书）是基因组破译方面的数据库。在给出染色体中一套完整基因的情况下，它可以对蛋白质交互（互动）网络在各种各样的细胞活动过程起的作用做出预测。KEGG的PATHWAY数据库整合当前在分子互动网络（比如通路、联合体）的知识，GENES/SSDB/KO数据库提供关于在基因组计划中发现的基因和蛋白质的相关知识，COMPOUND/GLYCAN/REACTION数据库提供生化复合物及反应方面的知识。 高通量转录组测序找融享生物。
问：能否用FPKM进行差异分析？
答：在做差异分析时，我们是采用readcount数据，通过DESeq或者TMM标准化后，进行差异分析。FPKM实际上也是对readcount进行标准化处理的一种方法，各种标准化方法优劣势比较见下图(Dillies, M. A. et al, 2013)，可以看出，在进行差异分析时，DESeq和TMM的标准化效果比较好，FPKM的标准化效果较差，所以，不推荐使用FPKM进行差异分析。
问：为什么要用校正后的p值，能直接用p_value吗？
答：校正后的p值（padj/qvalue），是对p值进行了多重假设检验，能更好地控制假阳性率 上海哪家做转录组好找融享生物。陕西医学转录组测序机构哪家好
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问：样品间的相关性有何意义？如何计算?
答：样品间的相关性反应了样品间的相似程度，即不同处理或组织的样品在表达水平方面的相似度。相关系数越接近1，样品间的相似度越高，样品间的差异基因也越少。生物学重复间的样品的相关系数应大于生物学重复外的样品的相关系数。相关系数的计算方法有三种：A. Pearson correlation; B. Spearman rank correlation; C. Kendall’s τ。我们使用R语言进行Pearson相关系数的计算。
问：认为基因表达的阈值是多少？为什么设置为这个阈值？
答：认为FPKM > 1是基因表达的。这个阈值是主流杂志推荐的，也能够很好的反应基因的表达水平。 天津真核有参转录组测序公司哪家好
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