将探针的 TM 值提高 10 ℃ 左右，从而使其能够分辨 1 个碱基的差别，如完全配对则有荧光信号，若有1 个 碱基不匹配则没有信号，而且连在 MGB 分子后面的 是非荧光物质的淬灭基团，从而使这种探针具备更好 的淬灭效果，且无背景荧光、荧光标记灵活、荧光信号
的信噪比高、退火温度高、探针短、核酸多态性( SNP) 识别率高，从而使 TaqmanMGB 探针具备了更加广阔 的应用前景。 不同qPCR会有不同的优势。贵州qPCR服务
荧光化学：荧光定量 PCR 所使用的荧光化学可分
为两种：荧光探针和荧光染料[9]。其原理：TaqMan 荧
光探针：PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特
异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记
一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，
报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR 扩增
时，Taq 酶的 5’~3’外切酶活性将探针酶切降解，使
报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统
可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有一个
荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形
成完全同步。 江西实时荧光定量qPCR哪家好的不同qPCR会有不同的优势。
分子信标(molecular beacons)是 TaqMan 探针的衍生形式。它是由一种单链 DNA 形成的发夹结构 ,一端标记报告基团, 另一端标记 淬灭基团 , 当形成发夹结构时 , 荧光报告基团与淬 灭基团相互靠近 , 发生 FRET , 当热循环温度达到 分子信标的解链温度时 ,其构象发生改变 , 能与模 板结合而完全伸展成线性分子 , 使 FRET 消失 , 报 告基团发出荧光信号 。与探针互补的模板数量越 多荧光信号越强 , 以此达到定量的目的 。分子信 标特别适用于检测点突变 , 能区分只有一个核苷 酸差异的不同 DNA 序列 ,而且其敏感性远比同等 长度的寡核苷酸探针要高 。
Absolute Quantification法也称作标准曲线法，是一种利用已知的标
准曲线来定量未知样本目的模板起始量的方法。以 5 点梯
度稀释所得的标准品为模板，经实时荧光定量 PCR 扩增，以
目的模板初始拷贝数的对数为横坐标，检测到的 CT 值为纵
坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程，将未知样本的 CT
值带入该方程即可计算出目的模板的起始量。标准曲线的各
项指标：斜率、扩增效率（E）、相关系数（R2
）、间距均需进行
严格评价，从而确保该曲线的可用性。 对于不同的需求我们选择不同的。
分子信标(molecular beacons)是TaqMan 探针的衍生形式它的主要缺点是 :① 杂交时探针不能完全与模板结合 , 因此稳定性较差。 ②探针合成时标记较复杂(蔡霞, 2005)。目前 , 分子信标技术已应用于 SNPs 分析 、基因定量分析 、 疾病基因检测与诊断等生物领域 , Bauerfeind 等 (1996)利用分子信标技术对绵羊 、山羊和牛的副结 核分枝杆菌做了分子鉴定;John 等(2007)通过分子 信标检测猪病病原体 ,证明了该方法比常规 PCR 具 有更高的敏感性 。分子信 标特别适用于检测点突变 , 能区分只有一个核苷 酸差异的不同 DNA 序列 ,而且其敏感性远比同等 长度的寡核苷酸探针要高 。根据您的具体需求选择不同的qPCR。安徽实时荧光qPCR机构
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在常规 PCR 基础上添加了荧光染料或荧光探 针 。而用于常规 PCR 的专门热循环仪配备荧光检 测模块 ,可监测扩增时的荧光 。荧光染料能特异性 掺入 DNA 双链, 发出荧光信号, 而不掺入双链中的 染料分子不发出荧光信号 , 从而保证荧光信号的增 加与 PCR 产物增加完全同步 。荧光探针法是指当 标记在探针的 5 ′端荧光报告基团 (reporter R )未被 标记在3 ′端淬灭基团 (quencher Q )影响时, 可检测 到报告基团的荧光信号 。检测到的荧光信号的强度 与 PCR 反应产物的量成正相关,即每扩增一条 DNA 链, 就有一个荧光分子形成, 实现了荧光信号的累积 与 PCR 产物的形成完全同步 。贵州qPCR服务
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