什么是核酸:由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的好基本物质之一。核酸较广存在于所有动植物细胞、微生物内、生物体内的核酸常与蛋白质结合形成白。不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA)。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。提取核酸的方法及其优缺点:1.保证核酸一级结构的完整性。2.排除其它分子的污染。核酸提取应注意的问题:1.简化步骤,缩短提取时间2.减少化学因素对核酸的降解3.减少物理因素对核酸的降解:机械剪切力和高温4.防止核酸的生物降解。 核酸提取仪需要注意的事项:避免水或者其他液体溅入其中。上海核酸提取价格
磁珠法核酸提取仪的特点:1. 能够实现自动化、高通量操作。2. 操作简单、快速。3. 安全环保。4. 高纯度,高得率。5. 无污染,且结果稳定。6. 成本低廉,便于普遍应用。7. 可以同时处理不同类型的样本。注意事项:1. 仪器的安装环境:正常的大气压(海拔高度应该低于3000m)、温度20-35℃、典型使用温度25℃、相对湿度10%-80%、畅通流入的空气为35℃或以下。2. 避免将仪器放置在靠近热源的地方,如电暖炉;同时为防止电子元件的短路,应避免水或者其他液体溅入其中。3. 进风口和排风口均位于仪器背面,同时避免灰尘或纤维在进风口聚集,保持风道的畅通。4. 核酸提取仪离其他竖直面至少10cm,5. 仪器接地:为了避免触电事故,仪器的输入电源线必须接地。6. 远离带电电路:操作人员不得擅自拆解仪器,更换元件或进行机内调节必须有持证的专业维修人员完成,不要在接通电源的情况下更换元件。深圳全血核算提取试剂盒哪家好核酸提取仪可根据需求自定义裂解、洗脱温度。
该方法结合高盐沉淀,可以实现简单的操作,但纯度及得率的稳定性可能会比用PC抽提的差一些。高浓度蛋白质变性剂(如GIT、GuHCl等)的裂解方法,是抽提RNA的选择。总RNA的抽提,重要的是快速裂解细胞膜,至于与基因组DNA相连接的蛋白质的裂解以及基因组与蛋白质"缠"住的问题,因为都不会对以后的纯化产生大的影响,可以不考虑。高浓度蛋白质变性剂能快速破坏细胞膜,进而迅速压抑住细胞内的RNA酶,从而确保了RNA的完整性。除了极少量不适用该方法的样品–主要是植物,其它绝大部分样品的RNA的抽提,都可以以高浓度的蛋白质变性剂为基础的。该方法也可用于基因组DNA抽提,非常快速简单,但纯度不是很高。
洗涤步骤:1.洗涤对于整个提取步骤至关重要,关系到核酸的纯度,核酸的纯度直接影响下游 PCR 应用。磁棒的振荡幅度和混合时间会影响洗涤效率。磁棒振荡幅度太小或混合时间太短,有杂质残留在磁珠上会影响磁珠吸附核酸的能力。振荡太剧烈或时间太长,会丢失部分核酸或造成核酸的断裂、降解,得率下降。2.洗脱步骤洗脱步骤直接影响核酸得率,影响洗脱效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脱温度和时间。磁珠未充分晾干,可能会有醇类等杂质残留,影响后续 PCR 反应;磁珠过分干燥,核酸可能会干结在磁珠上,导致洗脱效率下降。适当提高洗脱温度和时间,有利于核酸从磁珠上游离下来,时间过长或温度过高,核酸有可能会降解,需要把握其中的平衡。核酸中因为嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键,所以核酸具有紫外吸收的特性。
磁珠法核酸提取的优越性:当前随着基因检测、个性化用药、产前诊断等技术的普及,在生物行业各领域均追求高通量、自动化的快速模式,传统DNA提取方法的局限性越来越明显,而磁珠法DNA提取的优势性则越来越明显;磁珠法DNA提取能够实现自动化、高通量操作,操作简单、耗时短,不使用传统方法中的苯、酚类、氯仿等有毒试剂,安全无毒完全符合现代环保理念;与核酸的特异性结合使得提取的核酸纯度高、浓度大。RNA的去除,在Solution I 中加入RNase A (100μg/mL) 可以有效的去除RNA残留。核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器。南京自动核算提取设备批发
核酸与磁珠的结合主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。上海核酸提取价格
提取方法: 1.表面活性剂快速制备法 使用Triton X-100A或NP40表面活性剂对细胞破碎,然后使用蛋白酶K或酚将蛋白去除,使用乙醇沉淀或透析。 2.加热法快速制备 温度96℃-100℃加热5min,之后离心后取上清,能够在PCR反应时使用。 3.碱变性快速制备 首先使用NaOH作用20min,再将HCI加入中和,离心后取上清,含有少量DNA。 4.玻璃棒缠绕法 使用盐酸胍对细胞进行裂解,在乙醇上铺上裂解物,然后在界面使用带钩或U型玻璃棒轻搅,在玻棒绕DNA沉淀液,使得80kbDNA生成。 上海核酸提取价格