简化基因组甲基化测序(ReducedRepresentationBisulfiteSequencing,RRBS)是通过限制性酶切的方法富集基因组DNA上富含CCGG位点的片段,经Bisulfite处理和高通量测序技术进行基因组CpG富集区域内的单碱基分辨率的甲基化测序。相对WGBS而言RRBS技术作为高性价比的甲基化测序方案,测序量大幅减少,在大规模临床样本研究中具有很不错的应用价值。技术优势从项目背景了解、协助方案设计、实验材料选取、建库测序,到数据分析,每个项目有特定的科学问题;需要专业、有价值的建议;科学、缜密的设计;及时高效的沟通;以保障高质量研究成果。信息分析基于简化基因组范围的甲基化分析,数据质控,5mCCalling,5mC在基因组、染色体、功能元件上的分布,多样本甲基化差异聚类,差异甲基化DMR鉴定及相关基因的功能分析,结合项目背景和科学问题的数据亮点挖掘。 6mA在细菌、藻类及动植物基因组中存在。浙江850K芯片技术服务服务
亚硫酸盐结合测序是DNA甲基化检测的“金标准”方案。除了全基因组甲基化测序等研究手段,对于目标基因/位点检测或者转化医学应用研究来说,需要灵活的靶向甲基化测序方案。BSP(BisulfiteSequencingPCR)结合高通量测序的TargetBisulfiteSequencing满足几个到上百个基因/位点的验证需求,具有高通量、低成本的优势,***用于临床大样本多位点的甲基化biomarker筛选及高水平文章甲基化验证环节。微生物定植对肠道免疫和代谢相关基因DNA甲基化的影响——团队成员发表.(IF=)我们以早产幼猪为模型,利用RRBS测序比较正常(n=7)和口服***(n=7)的肠道DNA甲基化差异,发现与先天免疫应答、吞噬和代谢等相关基因的DNA甲基化和表达存在***的差异,并通过高通量BSP测序对EGFL7、LBP8、PTPRE差异甲基化基因进行了验证。 北京ATAC技术服务活动细胞、全血、组织样本干冰运输。
安捷伦公司芯片平台因其强大的eArray探针设计平台,可以进行芯片的定制。在甲基化领域同样适用。合作伙伴利用Agilent芯片平台设计了一款专门针对**启动子区域CpG岛的甲基化芯片。绝大多数基因是针对基因的启动子区域的CpG岛设计探针。这款芯片上一共有4160个功能注释比较明确的基因,其中2128个和**发生有关系。从功能上分,有256基因和细胞凋亡有关,1273个基因和信号传导有关,487个基因和压力和衰老有关。采用的是8*60K的芯片格式。利用MeDIP原理进行甲基化检测的方法探针的分辨率可以精确到100 bp。
**预防和***的一个手段是通过去甲基化恢复某些关键的抑*基因或DNA修复基因的活性,目前研究**多的是DNMTs***剂,它通过***DNMT活性以逆转异常的DNA甲基化。**个表型修饰药物为5-azacytidine及其类似物5-aza-2'-deoxycytidine(5-aza-CdR),这类药物已经美国FDA批准用于白血病前骨髓增生异常综合征的***。5-aza-CdR是胞嘧啶的类似物,在DNA复制过程中可以掺入到DNA链中,一方面它可以降低DNA接收甲基的能力,另一方面它***DNMT活性,导致DNA甲基化水平的降低。体外和体内试验均表明,5-aza-CdR具有降低超甲基化的抑*基因甲基化水平从而*****的能力,临床表明应用5-aza-CdR可提高部分IV期小细胞肺*患者生存率,但该药也存在着不可忽视的毒副作用(如特异性不强,不能针对某一特定抑*基因进行靶向***;高剂量的5-aza-CdR可能诱发**的转移),因此其在临床上的应用受到了很大限制。也有研究表明,低剂量的As2O3可起到***肝*的目的。 云生物提供甲基化服务。
全基因组甲基化测序(WholeGenomeBisulfiteSequencing,WGBS)是将重亚硫酸盐Bisulfite处理和高通量测序技术相结合,对有参考基因组进行全基因组范围的单碱基分辨率的甲基化测序,是DNA甲基化检测的“金标准”。WGBS满足全基因组DNA甲基化图谱及疾病关联分析、基因调控分析、疾病的甲基化标志物筛选等探索性课题的研究。技术优势DNA甲基化检测**有力的工具单碱基分辨率,检测每个C碱基的甲基化状态全基因组范围,**限度地获得甲基化信息适合所有有参考基因组的物种适合各种类型的样本样本要求:基因组DNA:>=3ug;样品浓度>30ng/ul;无RNA和蛋白污染建库测序:测序策略:IlluminaHiSeq,PE150;测序深度:>=30X信息分析基于全基因组范围的甲基化分析,数据质控,5mCCalling,5mC在基因组、染色体、功能元件上的分布,多样本甲基化差异聚类,差异甲基化DMR鉴定及相关基因的功能分析,结合项目背景和科学问题的数据亮点挖掘。 人类基因组有约56M的CpG位点,CpG岛约3万个。四川WGBS技术服务专业服务
DNA甲基化是生物界神奇的“帽子”。浙江850K芯片技术服务服务
Agilent平台因为MeDIP技术本身的特点,都不能到达单碱基的分辨率,而Illumina的Infinium和GoldenGate检测技术却做得到。Illumina的Infinium甲基化检测技术来源与前期的SNP检测,采用的是单碱基延伸的原理。分析利用两个位点特异的探针检测这些序列差异的位点,一个探针是为甲基化位点(M磁珠类型)设计的,而另一个是为未甲基化位点(U磁珠类型)设计的。探针的单碱基延伸掺入了一个标记的ddNTP,它随后被荧光试剂染色。通过计算甲基化与未甲基化位点的荧光信号比例,可确定检测位点的甲基化水平。Illumina公司早期推出的InfiniumHumanMethylation27BeadChip芯片覆盖27,578个CpG位点。这款芯片在医学领域有***的应用,除了和**相关的甲基化筛选之外,也能用于其他疾病相关甲基化检测。因此对这款产品,研究者给予了很高的评价,目前此产品已停产,取而代之的是InfiniumHumanMethylation450BeadChip芯片。它以单碱基分辨率覆盖了基因组中超过45万个甲基化位点,实现了基因区域和CpG岛的***覆盖。此外,还包括CpG岛之外的CpG位点,在人类干细胞中鉴定出的非CpG甲基化位点,以及**和正常组织中差异表达的甲基化位点等等。它的高覆盖度、高通量以及低价格。 浙江850K芯片技术服务服务