耐药基因表达的研究：目前研究中发现主要的
耐药机制有：ATP结合盒基因超家族的膜转运蛋白介导
的耐药，这些蛋白包括：MDR-1基因编码的P-糖蛋白，
多药耐药相关蛋白，肺耐药相关蛋白，乳腺耐药蛋
白等；酶介导的耐药，包括拓扑导构酶，谷胱甘肽及谷
胱甘肽-S-转移酶，蛋白激酶C，脱氧胞嘧啶核苷激酶等，
凋亡基因介导的耐药，如bcl-2家族，p53基因，c-myc
等。多药耐药是多因素，多种机制共同作用的结果。
real-time反转录 PCR是了解耐药指导临床策
略的有用手段，它能观测用药前后及复发时细胞的
耐药基因mRNA表达变化，从而及时调整方案和评
价疾病的预后 对于不同的需求我们选择不同的。陕西TaqMan荧光探针qPCR公司电话
SYBR GreenI 的优点在于:①成本较 低, 不需合成和标记探针 ;②适合初步筛查:选用 SYBR 筛查 , 再用探针法精确定量少数关键样品 。 但SYBR GreenI 缺点有:①特异性差 , 不能分辨主带与杂带 , 给 出的是总信号, 所以在低样本浓度时,不能进行基因 突变分析 。但该方法可利用熔点曲线分析将特异产 物、引物二聚体和非特异性产物区别开来,不需要通 过电泳鉴定(Qzaki 等 , 1992);②不能做多重检测 , 每孔只能检测 1 个目标基因;③灵敏度低, 适合于 5000 拷贝以上的基因定量。四川实时荧光定量qPCR公司电话各种qPCR应用领域还是不一样的。
real-time Q-PCR 技术中，无论是相对定量还是
标准曲线定量方法仍存在一些 PCR 定量方法均有的问
题，有待解决。在标准曲线定量中，标准品的制备是一
个必不可少的过程。目前由于无统一标准，各个实验室
所用的生成标准曲线的样品各不相同，致使实验结果缺
乏可比性。此外，用 real-time Q-PCR 来研究 mRNA 时，
受到不同 RNA 样本存在不同的逆转录效率的限制。在相
对定量中，其前提是假设内源控制物不受实验条件的影
响，合理地选择合适的不受实验条件影响的内源控制物
也是实验结果可靠与否的关键。
实时荧光定量 PCR
技术可用于检测特异性突变基因，因为扩增 DNA 的 核苷酸序列不需要分子克隆和宿主细胞内的生长准 备，即可在媒介生物分子纯化过程中直接测得。利用
实时荧光定量 PCR 和间接测序方法，可对已知 DNA 序列进行基因突变及多态性分析。
实时荧光定量 PCR 技术
可用于对转基因产品的检测和定量。目前，该技术在
生物安全检测中的应用主要有: 动物中基因载体
生物分布的确定、生物疗法中残留 DNA 的定量、污染
细胞库和终产物中和细菌核酸的检测、研究
中水平的定量、疫苗中逆转录活性的特 异性检测及遗传稳定性监控中转基因拷贝数的确定 等。实时荧光定量 PCR 技术可达到简便、快速、准确 地检测转基因产品的目的。
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复合探针 复合探针(complex probes)法的 基本原理综合了 LightCy cler 和分子信标 2 种技术 的优点 ,还克服了他们的不足。首先合成 2 个探针, 一是荧光探针(25 bp), 5' 端接一荧光分子 ,另一为 淬灭探针(15 bp), 3' 端接一淬灭分子 , 淬灭探针能 与荧光探针 5' 端杂交 。当溶液中没有模板时, 2 种 探针特异结合,荧光探针发出的荧光被淬灭探针吸 收 ,溶液中没有荧光产生;当溶液中有模板时 ,在较 高温度下荧光探针优先与模板结合, 从而使两探针 分离 ,产生荧光。荧光强度与溶液中模板数量成正 比 ,因此可进行 PCR 定量。其优点为:①使用非荧 光淬灭剂,本底低 ;②对扩增效率影响小 ;③探针设 计 、合成 、标记、纯化方便。一个好的qPCR项目需要具备哪些特点您知道吗？河北TaqMan探针法qPCR公司
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