江苏SYBRGreen法qPCR服务

荧光标记引物是根据分子信标的原理变化而来 的一种联合分子探针系统。该方法是把荧光基团标 记的发夹结构序列直接与 PCR 引物结合，从而使荧 光标记基团直接进入 PCR 扩增产物。在没有单链模 板的情况下，该引物自身配对形成发夹结构使荧光淬 灭; 在模板存在的情况下，引物与模板配对，发夹结构 打开，产生荧光信号。荧光标记引物通过二级结构实 现淬灭，不需要荧光淬灭基团，也不需要设计特异的 探针序列，能更快地发射荧光，而且信号更为强烈。 由于没有探针控制特异性; 因此，特异性要弱于探针

技术。目前，荧光标记引物主要有 3 种: 发卡式引物、 蝎子引物和 LUX 引物。 上海融享生物科技有限公司主营项目包括qPCR。江苏SYBRGreen法qPCR服务

双杂交探针也是 TaqM an 探针的衍 生形式,是由 Roche 公司开发的一种 PCR 定量技术 (LightCy cler(r)实时荧光定量 PCR 系统)。该技术 的特点是将荧光基团和淬灭基团分别标记在发光探 针的 5' 端和淬灭探针的 3' 端两个不同探针上 ,两探 针可与模板同一条链相邻的序列杂交, 杂交时两探 针的荧光基团和淬灭基团便紧密相邻(1 ～ 5 bp), 从 而发生 FRET 使荧光淬灭, 荧光淬灭的程度与起始 模板的量成反比, 以此可以进行 PCR 定量分析 (Hardegg er 等 , 2000)。该方法的特点是淬灭效率 高,但由于 2 个探针结合在模板上 ,从而影响到扩增 效率;另外 ,由于需要合成 2 个较长的探针, 合成成 本相对较高。江苏SYBRGreen法qPCR服务上海融享生物科技有限公司项目的qPCR怎么样？

在常规 PCR 基础上添加了荧光染料或荧光探 针 。而用于常规 PCR 的专门热循环仪配备荧光检 测模块 ,可监测扩增时的荧光 。荧光染料能特异性 掺入 DNA 双链, 发出荧光信号, 而不掺入双链中的 染料分子不发出荧光信号 , 从而保证荧光信号的增 加与 PCR 产物增加完全同步 。荧光探针法是指当 标记在探针的 5 ′端荧光报告基团 (reporter R )未被 标记在3 ′端淬灭基团 (quencher Q )影响时, 可检测 到报告基团的荧光信号 。检测到的荧光信号的强度 与 PCR 反应产物的量成正相关,即每扩增一条 DNA 链, 就有一个荧光分子形成, 实现了荧光信号的累积 与 PCR 产物的形成完全同步 。

切断探针后 , FAM 与 TAM RA 分离 ,荧 光信号得到释放。这时荧光探测系统就能检测到光 密度有所增加。模板每复制 1 次, 就有 1 个探针被 切断 ,并有 1 个荧光信号被释放。由于理论上被释 放的荧光基团数和 PCR 产物数是一对一的关系 ,且 光密度同被释放的荧光基团数也呈正比关系 ,因此 该技术可对模板进行准确定量。但 T aqM an 也存 在一定不足 ,主要表现在:①由于采用荧光和淬灭基 团双末端标记,因此淬灭难以彻底,本底较高。 ②报 告基团的水解利用的是 Taq 酶的 5' ※3' 外切活性, 因此定量时容易受酶活性影响。 ③探针标记成本较 高 ,不便普及应用。上海融享生物科技有限公司主营qPCR。

荧光探针技术是根据标记基团的荧光共振能量 转 移 (fluorescence resonance energy transfer , FRET)原理而实现的。当某个荧光基团的发射光 谱与另一个荧光基团的吸收光谱重叠, 且 2 个基团 距离足够近时, 能量可以从短波长(高能量)的荧光 基团传递到长波长(低能量)的荧光基团, 相当于短 波长荧光基团释放的荧光被屏蔽, 这个过程称为 FRET 。定量原理:实时荧光定量 PCR 是在反应体系中 加入荧光基团 ,使产物的数量与检测到的荧光强度 成线性关系, 从而得出产物的扩增曲线 。理想的扩 增曲线应为 J 型,符合 2N 方程(其中N 为 PCR 的循 环次数),但实际上扩增曲线为 S 型。在 PCR 反应 早期,不能将产生荧光的水平与背景明显区别, 之后 荧光的产生进入指数期 、线性期和**终的平台期 ,因 此可以在指数期的某一点上检测 PCR 产物的量 ,并 由此推断起始模板含量 。 上海融享生物科技有限公司的qPCR种类繁多。天津实时荧光qPCR机构哪里有

上海融享生物科技有限公司qPCR的上乘。江苏SYBRGreen法qPCR服务

在 PCR 反应体系中，加入过量的 SYBR Green Ⅰ荧光 染料，使其特异地与 dsDNA 分子结合后，发射荧光信 号，荧光强度随着聚合反应的进行逐渐增加; 因此，可 被荧光探测系统检测到，荧光强度的增加与初始模板 量相关，可以进行定量 DNA 分析。荧光染料的优势 在于它能监测任何 dsDNA 序列的扩增，不需要探针 的设计，检测方法简便，降低了检测成本。然而，由于 荧光染料能与任何 dsDNA 分子结合，也能与非特异

性的 dsDNA 分子( 如引物二聚体) 结合，产生荧光干 扰，使试验产生假阳性结果。目前，可以用带有熔解 曲线分析的软件解决这个问题。 江苏SYBRGreen法qPCR服务